TIỂU LUẬN:CHẨN ĐOÁN AUJESZKY’S DISEASE VIRUS (ADV) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY TẾ BÀO

1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ MINH BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ************* Bài tiểu luận CHẨN ĐOÁN AUJESZKY’S DISEASE VIRUS (ADV) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY TẾ BÀO Môn học: Chẩn đoán bệnh gia súc, gia cầm GVHD: TS. Nguyễn Ngọc Hải SVTH: Vũ Thị Phương Thảo Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 10/2009 2 Mục lục I. Đặt vấn đề..........................................................................................3 II. Tổng quan.........................................................................................3 II.1 Virus Aujeszky.....................................................................3 II.1.a Tình hình.................................................................3 II.1.b Đặc tính, phân loại..................................................4 II.1.c Hình thái và cấu trúc ADV.....................................5 II.1.d Sức đề kháng của ADV..........................................6 II.1.e Dịch tễ học..............................................................7 Các loài vật mẫn cảm với ADV.............................7 Đường lây nhiễm ...................................................7 II.1.f Triêu chứng lâm sàng..............................................9 II.1.g Bệnh tích...............................................................11 II.2 Phân lập ADV trên môi trường tế bào...............................11 II.2.a Chuẩn bị mẫu........................................................12 II.2.b Chuẩn bị môi trường tế bào..................................14 II.2.c Chẩn đoán ADV bằng Shell Vial Assay...............15 II.2.d Chẩn đoán ADV bằng 24-Well Plate Cell Culture Assay.................................................................15 II.2.e Thí nghiệm của Rafique A. Tahir, Sagar M. Goyal ........................................................................................17 III. Kết luận.........................................................................................18 IV. Tài liệu tham khảo .......................................................................18 3 I. Đặt vấn đề DAujeszky’s disease virus (ADV) gây ra những thiệt hại to lớn về kinh tế đồi với ngành chăn nuôi heo vì nó làm tăng tỉ lệ chết và gây ra những rối loạn sinh sản ở heo (Pensaert and Kluge, 1989). Vì thế cần có một phương pháp chẩn đoán nhanh sự vấy nhiễm của ADV trong các bầy đàn để kiểm soát một cách hiệu quả sự lây nhiễm của bênh bằng cách cách ly và loại bỏ các đàn gia súc nhiễm nhằm làm giảm những thiệt hại về kinh tế mà ADV đã gây ra. DNhiều phương pháp đã được sử dụng để chẩn đoán sự vấy nhiễm của ADV, bao gồm sự phân lập virus bằng phương pháp nuôi cấy tế bào, phương pháp miễn dịch peroxidase, phương pháp miễn dịch huỳnh quang, dot-blot, PCR. Mỗi phương pháp đều có những ưu, nhược điểm riêng được so sánh về các mặt độ nhậy, độ đặc hiệu, dễ phát hiện, chi phí và tốc độ. DTrong những năm gần đây, sự phân lập virus bằng shell vial assay (SVA) kết hợp với kĩ thuật miễn dịch huỳnh quang hay miễn dịch peroxidase được sử dụng để phát hiện cytomegaloviruses, herpes simplex virus, respiratory virus. Kĩ thuật SVA nhanh, nhậy và là phương pháp đặc biệt đối với sự chẩn đoán các loại virus này. (b) II. Tổng quan 1) Virus Ạujeszky a) Tình hình DA. Aujeszky đã phát hiện ra bệnh này vào năm 1902 ở Hungary trên bò và chó, đặt tên là bệnh “giả dại” vì ở phần lớn các loài động vật mắc bệnh đều có triệu chứng ngứa ngáy và tự cắn xé mình. Lợn mắc bệnh không có những triệu chứng này mặc dù chỉ riêng lợn là kí chủ tự nhiên của virus. Các động vật mắc bệnh đều có độ mẫn cảm cao, tỉ lệ chết có thể lên tới 100%. 4 DỞ nước ta, bệnh có từ bao giờ chưa rõ, nhưng từ năm 1975 đến nay bệnh có ở khắp các tỉnh phía Nam và nhiều tỉnh phía Bắc (a) DPhân bố • AJD xuất hiện ở hầu hết các quốc gia Châu Âu, Mỹ, Mexico, Cuba, Brazil, Venezuela, Nhật Bản, Đài Loan, Đông Nam Á. • Trong những năm gần đây bệnh đã gia tăng tỷ lệ nhiễm bệnh và trở nên nghiêm trọng tại các vùng có những nông trai chăn nuôi heo tập trung. • Ở Thái Bình Dương, AJD xảy ra ở New Caledonia tới năm 1984, ở Newzealand và ở Polynesia thuộc Pháp (bằng chứng huyết thanh học) tới năm 1999, nó được biết là đã xảy ra ở Samoa, Tonga, Vanuatu, Wallis, Futuna và ở những đàn lợn hoang dã ở Papua New Guinea. Chưa bao giờ có báo cáo từ Úc. (http://spc.int/rahs/manual/Multiple_Species/AUJESZKYSE.H TM). b) Đặc tính, phân loại DHerpesvirus là một loại virus có một lượng DNA lớn và chu kì sinh sản xảy ra trong nhân tế bào. Họ Herpesviridae được chia làm 3 họ phụ: • Alphaherpesvirinae • Betaherpesvirinae • Gammaherpesvirinae (i) DAujeszky’s disease (AJD), còn được gọi là bệnh giả dại (pseudorabies), là một căn bệnh do porcine herpesvirus-1 [Aujeszky’s disease virus (ADV), pseudorabies virus (PRV)] gây ra. Virus này thuộc bộ Herpesviridae, giống Alphaherpesvirinae. 5 DADV nhiễm vào hệ thống thần kinh trung ương và những cơ quan khác, ví dụ như cơ quan hô hấp, nhiễm vào nhiều loại động vật có vú ngoại trừ người và các loài khỉ không đuôi. DKí chủ tự nhiên của ADV là heo, là một nguồn lây nhiễm tiềm tàng (ngoại trừ heo con dưới 2 tuần tuổi bị chết do viêm não). (g) c) Hình thái và cấu trúc ADV Cấu trúc tổng quát của ADV được cho thấy ở hình 1. • Phần lõi bao gồm một sợi đôi DNA dài khoảng 150 kbp được bao bọc bởi một capsid, vỏ (tegument) và vỏ bọc (envelope). • Bộ gen của ADV bao gồm 2 vùng đơn vị (two unique regions), một đơn vị dài (unique long UL), và một đơn vị ngắn (unique shot US), được cặp sườn bởi 2 trình tự lặp lại, một cái bên trong (an internal one-IRS), một cái ở phía cuối (a terminal one-TRS). Cả bộ gen đã được Klupp và ctv giải trình tự. • Những gen khác nhau trong bộ gen của alphaherpesvirus được chỉ định bởi 2 kí tự là US hay UL phụ thuộc vào vị trí của nó trong đơn vị dài UL hay đơn vị ngắn US theo sau đó là một con số, con số chỉ ra vị trí của mỗi gen trong mỗi vùng đặc biệt. • Vỏ capsid của ADV đóng gói và bảo vệ bộ gen. Nó bao gồm 162 capsomers, 150 hexon (1 hexon có 6 phân tử VP5 là protein được biểu hiện bởi UL19 (pUL19) và 6 phân tử VP26 (pUL35) và 12 penton (11 penton bao gồm 5 phân tử VP5, 1 penton 12 ... - tailieumienphi.vn