Xem mẫu
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN BỘ MÔN SINH HỌC VÀ BỆNH THỦY SẢN
DƯƠNG VÕ MỸ HẠNH
XÁC ĐỊNH NỒNG ĐỘ ỨC CHẾ TỐI THIỂU (MIC) CỦA THUỐC NATSOL (KHÁNG SINH THỰC VẬT) LÊN VI KHUẨN Trung tâm Học Edwardsiella ictaluri@ Tài liệu họchydrophila liệu ĐH Cần Thơ VÀ Aeromonas tập và nghiên cứu
LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH NUÔI TRỒNG THUỶ SẢN CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN
2008
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN BỘ MÔN SINH HỌC VÀ BỆNH THỦY SẢN
DƯƠNG VÕ MỸ HẠNH
XÁC ĐỊNH NỒNG ĐỘ ỨC CHẾ TỐI THIỂU (MIC) CỦA THUỐC NATSOL (KHÁNG SINH THỰC VẬT) LÊN VI KHUẨN Edwardsiella ictaluri VÀ Aeromonas hydrophila
Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập và nghiên cứu
CÁN BỘ HƯỚNG DẪN TỪ THANH DUNG NGUYỄN THỊ NHƯ NGỌC
LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH NUÔI TRỒNG THUỶ SẢN CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN
2008
MỤC LỤC
MỤC LỤC ..................................................................................................... 1 DANH SÁCH HÌNH ..................................................................................... 3 DANH SÁCH BẢNG..................................................................................... 4 LỜI CẢM TẠ ................................................................................................ 5 TÓM TẮT...................................................................................................... 6 CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU........................................................................... 7 CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU ....................................................... 9
2.1 Bệnh do vi khuẩn E. ictaluri gây ra ..................................................................9 2.1.1 Một số đặc điểm của vi khuẩn E. ictaluri.......................................................9 2.1.2 Phân bố của vi khuẩn E. ictaluri ....................................................................9 2.2 Bệnh do vi khuẩn Aeromonas hydrophila .......................................................10 2.2.1 Một số đặc điểm về vi khuẩn Aeromonas hydrophila...................................10 2.2.2 Hình dạng khuẩn lạc....................................................................................10 2.2.3 Hình dạng tế bào .........................................................................................10 2.2.4 Phân bố của Aeromonas hydrophila.............................................................11 2.2.5 Bệnh xuất huyết do vi khuẩn A. hydrophila .................................................11 2.3 Cây thảo dược ................................................................................................12 2.3.1 Sơ lược về cây thảo dược.............................................................................12 2.3.2 Một vài cây thuốc thảo dược và công dụng phòng trị bệnh thủy sản.............12 2.3.3 Một số kết quả khoa học sử dụng cây thảo dược phòng và trị bệnh thủy sản 13 2.4 Natsol.............................................................................................................14 2.5 Chloramphenicol ............................................................................................14 2.6 Một số kết quả Học liệu ĐHxác định Thơ @ chế tốiliệu (MIC) trên thuốc kháng sinh cứu Cần nồng độ ức Tài thiểu học tập và nghiên thảo dược .............................................................................................................14 3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu...................................................................16 3.1.1 Thời gian nghiên cứu...................................................................................16 3.1.2 Địa điểm nghiên cứu ...................................................................................16 3.2 Vật liệu nghiên cứu ........................................................................................16 3.2.1 Hoá chất và môi ttrường ..............................................................................16 3.2.2 Thuốc kháng sinh ........................................................................................16 3.2.3 Dụng cụ thí nghiệm .....................................................................................16 3.2.4 Vi khuẩn thí nghiệm ....................................................................................17 3.3 Phương pháp nghiên cứu ................................................................................17 3.3.1 Chuẩn bị nguyên liệu nghiên cứu.................................................................17 3.3.1.1 Chuẩn bị vi khuẩn.....................................................................................17 3.3.1.2 Chuẩn bị dung dịch thuốc kháng sinh ......................................................18 3.3.2 Thực hiện nghiên cứu ..................................................................................20 3.3.2.1 Nghiên cứu thăm dò .................................................................................20 3.3.2.1 Phương pháp lập kháng sinh đồ ................................................................21 3.3.2.2 Phương pháp xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) trên môi trường thạch (Lila Ruangpan, 2004): ........................................................................................22 3.3.2.3 Phương pháp xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) bằng phương pháp pha loãng (Geert Huys, 2002):..............................................................................23
Trung tâm
CHƯƠNG 3: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.........................................16
CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ THẢO LUẬN......................................................25
4.1 Kết quả nghiên cứu thăm dò khoảng nồng độ ức chế của thuốc kháng sinh thực vật natsol lên vi khuẩn gây bệnh trên cá tra ..........................................................25 4.2 Xác định nồng độ MIC ...................................................................................26 1
4.2 Kết quả kiểm tra kháng sinh đồ của thuốc natsol lên vi khuẩn E. ictaluri và A. hydrophila............................................................................................................27 4.3 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của thuốc Natsol lên vi khuẩn E. ictaluri và A. hydrophila bằng phương pháp pha loãng.........................................28 4.3.1 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của thuốc Natsol lên vi khuẩn A. hydrophila............................................................................................................28 4.3.2 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của thuốc Natsol lên vi khuẩn E. ictaluri .................................................................................................................30 4.2.3 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của thuốc Natsol lên vi khuẩn E. ictaluri và A. hydrophila bằng phương pháp thạch. ..............................................32
CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT ...................................................35
5.1 Kết luận .........................................................................................................35 5.2 Đề xuất...........................................................................................................35
TÀI LIỆU THAM KHẢO............................................................................36 Phụ lục A: Pha dung dịch nhuộm gram vi khuẩn.......................................41 Phụ lục B: Phương pháp nhuộm Gram vi khuẩn .......................................42 Phụ lục C: Pha môi trường ..........................................................................43 Phụ lục D: Pha nước muối sinh lý và pha môi trường NB .........................44 Phụ lục E: Pha thuốc kháng sinh chloramphenicol và natsol ....................45
Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập và nghiên cứu
2
DANH SÁCH HÌNH
Hình 2.1: Kết quả nhuộm gram vi khuẩn E. ictaluri ở vật kính 40X (gram âm – hình que) ........................................... ............................................................10 Hình 2.2: Kết quả nhuộm gram vi khuẩn A. hydrophila ở vật kính 40X (gram âm – hình que)................................... ............................................................11 Hình 4.3: Kết quả MIC trên môi trường thạch của vi khuẩn A. hydrophila (Đĩa đối chứng (trái), đĩa môi trường chứa thuốc nồng độ 375ppm (phải)).............34 Hình 4.4: Kết quả MIC trên môi trường thạch của vi khuẩn A. hydrophila (Đĩa đối chứng (trái), đĩa môi trường chứa thuốc nồng độ 750ppm (phải)).............34
Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập và nghiên cứu
3
nguon tai.lieu . vn
DƯƠNG VÕ MỸ HẠNH
XÁC ĐỊNH NỒNG ĐỘ ỨC CHẾ TỐI THIỂU (MIC) CỦA THUỐC NATSOL (KHÁNG SINH THỰC VẬT) LÊN VI KHUẨN Trung tâm Học Edwardsiella ictaluri@ Tài liệu họchydrophila liệu ĐH Cần Thơ VÀ Aeromonas tập và nghiên cứu
LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH NUÔI TRỒNG THUỶ SẢN CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN
2008
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN BỘ MÔN SINH HỌC VÀ BỆNH THỦY SẢN
DƯƠNG VÕ MỸ HẠNH
XÁC ĐỊNH NỒNG ĐỘ ỨC CHẾ TỐI THIỂU (MIC) CỦA THUỐC NATSOL (KHÁNG SINH THỰC VẬT) LÊN VI KHUẨN Edwardsiella ictaluri VÀ Aeromonas hydrophila
Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập và nghiên cứu
CÁN BỘ HƯỚNG DẪN TỪ THANH DUNG NGUYỄN THỊ NHƯ NGỌC
LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH NUÔI TRỒNG THUỶ SẢN CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN
2008
MỤC LỤC
MỤC LỤC ..................................................................................................... 1 DANH SÁCH HÌNH ..................................................................................... 3 DANH SÁCH BẢNG..................................................................................... 4 LỜI CẢM TẠ ................................................................................................ 5 TÓM TẮT...................................................................................................... 6 CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU........................................................................... 7 CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU ....................................................... 9
2.1 Bệnh do vi khuẩn E. ictaluri gây ra ..................................................................9 2.1.1 Một số đặc điểm của vi khuẩn E. ictaluri.......................................................9 2.1.2 Phân bố của vi khuẩn E. ictaluri ....................................................................9 2.2 Bệnh do vi khuẩn Aeromonas hydrophila .......................................................10 2.2.1 Một số đặc điểm về vi khuẩn Aeromonas hydrophila...................................10 2.2.2 Hình dạng khuẩn lạc....................................................................................10 2.2.3 Hình dạng tế bào .........................................................................................10 2.2.4 Phân bố của Aeromonas hydrophila.............................................................11 2.2.5 Bệnh xuất huyết do vi khuẩn A. hydrophila .................................................11 2.3 Cây thảo dược ................................................................................................12 2.3.1 Sơ lược về cây thảo dược.............................................................................12 2.3.2 Một vài cây thuốc thảo dược và công dụng phòng trị bệnh thủy sản.............12 2.3.3 Một số kết quả khoa học sử dụng cây thảo dược phòng và trị bệnh thủy sản 13 2.4 Natsol.............................................................................................................14 2.5 Chloramphenicol ............................................................................................14 2.6 Một số kết quả Học liệu ĐHxác định Thơ @ chế tốiliệu (MIC) trên thuốc kháng sinh cứu Cần nồng độ ức Tài thiểu học tập và nghiên thảo dược .............................................................................................................14 3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu...................................................................16 3.1.1 Thời gian nghiên cứu...................................................................................16 3.1.2 Địa điểm nghiên cứu ...................................................................................16 3.2 Vật liệu nghiên cứu ........................................................................................16 3.2.1 Hoá chất và môi ttrường ..............................................................................16 3.2.2 Thuốc kháng sinh ........................................................................................16 3.2.3 Dụng cụ thí nghiệm .....................................................................................16 3.2.4 Vi khuẩn thí nghiệm ....................................................................................17 3.3 Phương pháp nghiên cứu ................................................................................17 3.3.1 Chuẩn bị nguyên liệu nghiên cứu.................................................................17 3.3.1.1 Chuẩn bị vi khuẩn.....................................................................................17 3.3.1.2 Chuẩn bị dung dịch thuốc kháng sinh ......................................................18 3.3.2 Thực hiện nghiên cứu ..................................................................................20 3.3.2.1 Nghiên cứu thăm dò .................................................................................20 3.3.2.1 Phương pháp lập kháng sinh đồ ................................................................21 3.3.2.2 Phương pháp xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) trên môi trường thạch (Lila Ruangpan, 2004): ........................................................................................22 3.3.2.3 Phương pháp xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) bằng phương pháp pha loãng (Geert Huys, 2002):..............................................................................23
Trung tâm
CHƯƠNG 3: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.........................................16
CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ THẢO LUẬN......................................................25
4.1 Kết quả nghiên cứu thăm dò khoảng nồng độ ức chế của thuốc kháng sinh thực vật natsol lên vi khuẩn gây bệnh trên cá tra ..........................................................25 4.2 Xác định nồng độ MIC ...................................................................................26 1
4.2 Kết quả kiểm tra kháng sinh đồ của thuốc natsol lên vi khuẩn E. ictaluri và A. hydrophila............................................................................................................27 4.3 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của thuốc Natsol lên vi khuẩn E. ictaluri và A. hydrophila bằng phương pháp pha loãng.........................................28 4.3.1 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của thuốc Natsol lên vi khuẩn A. hydrophila............................................................................................................28 4.3.2 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của thuốc Natsol lên vi khuẩn E. ictaluri .................................................................................................................30 4.2.3 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của thuốc Natsol lên vi khuẩn E. ictaluri và A. hydrophila bằng phương pháp thạch. ..............................................32
CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT ...................................................35
5.1 Kết luận .........................................................................................................35 5.2 Đề xuất...........................................................................................................35
TÀI LIỆU THAM KHẢO............................................................................36 Phụ lục A: Pha dung dịch nhuộm gram vi khuẩn.......................................41 Phụ lục B: Phương pháp nhuộm Gram vi khuẩn .......................................42 Phụ lục C: Pha môi trường ..........................................................................43 Phụ lục D: Pha nước muối sinh lý và pha môi trường NB .........................44 Phụ lục E: Pha thuốc kháng sinh chloramphenicol và natsol ....................45
Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập và nghiên cứu
2
DANH SÁCH HÌNH
Hình 2.1: Kết quả nhuộm gram vi khuẩn E. ictaluri ở vật kính 40X (gram âm – hình que) ........................................... ............................................................10 Hình 2.2: Kết quả nhuộm gram vi khuẩn A. hydrophila ở vật kính 40X (gram âm – hình que)................................... ............................................................11 Hình 4.3: Kết quả MIC trên môi trường thạch của vi khuẩn A. hydrophila (Đĩa đối chứng (trái), đĩa môi trường chứa thuốc nồng độ 375ppm (phải)).............34 Hình 4.4: Kết quả MIC trên môi trường thạch của vi khuẩn A. hydrophila (Đĩa đối chứng (trái), đĩa môi trường chứa thuốc nồng độ 750ppm (phải)).............34
Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập và nghiên cứu
3