- Trang Chủ
- Công nghệ - Môi trường
- Luận văn : PHÂN LẬP, KHẢO SÁT ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ TÌM HIỂU KHẢ NĂNG SINH ENZYME CỦA VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS ĐỂ SẢN XUẤT THỬ NGHIỆM CHẾ PHẨM SINH HỌC part 1
Xem mẫu
- BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HCM
BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP
PHÂN LẬP, KHẢO SÁT ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ TÌM
HIỂU KHẢ NĂNG SINH ENZYME CỦA VI KHUẨN
BACILLUS SUBTILIS ĐỂ SẢN XUẤT THỬ
NGHIỆM CHẾ PHẨM SINH HỌC
Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC
Niên khoá: 2003 - 2007
Sinh viên thực hiện: BÙI THỊ PHI
Thành phố Hồ Chí Minh
- 2007 -
iii
- BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HCM
BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC
KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP
PHÂN LẬP, KHẢO SÁT ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ TÌM
HIỂU KHẢ NĂNG SINH ENZYME CỦA VI KHUẨN
BACILLUS SUBTILIS ĐỂ SẢN XUẤT THỬ
NGHIỆM CHẾ PHẨM SINH HỌC
Giáo viên hƣớng dẫn Sinh viên thực hiện
TS. NGUYỄN NGỌC HẢI BÙI THỊ PHI
Thành phố Hồ Chí Minh
- 2007 -
- LỜI CẢM ƠN
Tôi xin gửi lòng biết ơn sâu sắc đến:
Ban giám hiệu trường Đại học Nông Lâm TP.HCM, Ban chủ nhiệm Bộ môn
Công nghệ Sinh học, cùng tất cả Qúy thầy cô đã truyền đạt kiến thức cho tôi trong suốt quá
trình học tại trường.
TS Nguyễn Ngọc Hải, người thầy đã tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, động viên tôi
trong suốt thời gian thực tập và hoàn thành khoá luận tốt nghiệp này.
TS Lê Anh Phụng, BSTY Nguyễn Thị Kim Loan đã giúp đỡ và tạo mọi điều
kiện để tôi hoàn thành quá trình thực tập trong thời gian vừa qua.
Phòng Vi sinh truyền nhiễm khoa Chăn nuôi thú y đã cho phép và tạo điều kiện
thuận lợi cho tôi học tập và nghiên cứu tại phòng.
Các bạn lớp CNSH 29 đã luôn bên tôi, giúp đỡ, động viên, chia sẻ cùng tôi
trong thời gian thực tập cũng như trong suốt những năm học vừa qua.
Cha mẹ, bậc sinh thành đã sinh ra và nuôi dưỡng tôi, các anh chị em trong gia
đình luôn quan tâm, ủng hộ tôi học tập và hoàn thành khoá luận tốt nghiệp này.
Sinh viên thực hiện
Bùi Thị Phi
iii
- TÓM TẮT
BÙI THỊ PHI, Đại học Nông Lâm TP.HCM. Tháng 9/2007. "PHÂN LẬP,
KHẢO SÁT ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ TÌM HIỂU KHẢ NĂNG SINH
ENZYME (AMYLASE, PROTEASE) CỦA VI KHUẨN BACILLUS
SUBTILIS ĐỂ SẢN XUẤT THỬ NGHIỆM CHẾ PHẨM SINH HỌC"
Giáo viên hƣớng dẫn: TS. NGUYỄN NGỌC HẢI
Nhằm nâng cao năng suất và chất lượng sản phẩm chăn nuôi và để chế
phẩm sinh học được ứng dụng rộng rãi hơn và có tác dụng tốt hơn trong chăn nuôi,
chúng tôi tiến hành các thí nghiệm về điều kiện nuôi cấy (sục khí liên tục và không
sục khí), thời gian nuôi cấy (24 giờ, 48 giờ), ảnh hưởng của các loại môi trường
nuôi cấy, ảnh hưởng của pH và thời gian nuôi cấy vi khuẩn, nhiệt độ và thời gian
bảo quản chế phẩm để khảo sát khả năng sinh enzyme của vi khuẩn Bacillus
subtilis. Kết quả chúng tôi có được:
Phân lập, xác định được 10 chủng vi khuẩn Bacillus subtilis.
Khảo sát ảnh hưởng của điều kiện nuôi cấy (sục khí liên tục và không sục
khí), thời gian nuôi cấy (nuôi ở 24 giờ và 48 giờ) đến khả năng sinh enzyme
(amylase, protease) của vi khuẩn Bacillus subtilis thì chế độ sục khí liên tục và nuôi
ở 48 giờ vi khuẩn sẽ phát triển và sản sinh enzyme tốt hơn.
Khảo sát ảnh hưởng của các môi trường (rỉ đường + 2% tinh bột, rỉ
đuờng + 1% tinh bột, rỉ đường + 1% tinh bột + 0,5% pepton, TSB + 1% tinh bột)
đến hoạt độ enzyme của vi khuẩn thì ở môi trường rỉ đường + 2% tinh bột cho hoạt
độ enzyme tốt nhất so với 3 loại môi trường còn lại.
Khảo sát điều kiện (pH, thời gian) thích hợp cho sự sản xuất enzyme của
các chủng Bacillus subtilis thì ở pH = 7 và thời gian nuôi cấy là 48 giờ, hoạt độ
enzyme của vi khuẩn tốt nhất.
Nhiệt độ 4 - 100C giữ được hoạt độ enzyme tốt hơn ở nhiệt độ 30 - 370C
trong khảo sát về nhiệt độ và thời gian bảo quản chế phẩm.
iv
- ABSTRACT
A survey to define some culture conditions that affect on enzyme (amylase,
protease) productivity of Bacillus subtilis isolated strains was carried out and the
results had showed:
We subdivided and definned 10 strains Bacillus subtilis.
Bacillus subtilis isolated strains could produce more enzyme (amylase,
protease) in oxygen continuous supply conditions at 48 hours incubation.
The best result obtained for enzyme (amylase, protease) production with
sugar rust + 2% starch culture medium in comparing with the others (sugar rust +
1% starch, sugar rust + 1% starch + 0,5% peptone, TSB + 1% starch) and at pH = 7
for 48 hours culture.
Enzyme activity conserved better in 4 – 100C than in 30 – 370C.
v
- MỤC LỤC
LỜI CẢM ƠN .......................................................................................................... iii
TÓM TẮT ................................................................................................................ iv
ABSTRACT ...............................................................................................................v
MỤC LỤC ................................................................................................................ vi
DANH SÁCH CÁC BẢNG ..................................................................................... ix
DANH SÁCH HÌNH .................................................................................................x
DANH SÁCH SƠ ĐỒ.............................................................................................. xi
Chƣơng 1: MỞ ĐẦU .................................................................................................1
Đặt vấn đề .....................................................................................................1
1.1.
Mục đích đề tài .............................................................................................2
1.2.
Yêu cầu đề tài ...............................................................................................2
1.3.
Chƣơng 2: TỔNG QUAN .........................................................................................3
Sơ lược về vi khuẩn Bacillus subtilis ...........................................................3
2.1.
Lịch sử phát hiện ...................................................................................3
2.1.1.
Đặc điểm phân loại và sự phân bố của vi khuẩn Bacillus subtilis ........3
2.1.2.
Đặc điểm hình thái ................................................................................4
2.1.3.
Đặc điểm nuôi cấy ................................................................................4
2.1.4.
Đặc điểm sinh hoá .................................................................................5
2.1.5.
Bào tử và khả năng tạo bào tử của vi khuẩn Bacillus subtilis ..............6
2.1.6.
Cấu tạo bào tử ................................................................................6
2.1.6.1.
Khả năng tạo bào tử .......................................................................6
2.1.6.2.
Tính chất đối kháng ..............................................................................6
2.1.7.
Giới thiệu về enzyme amylase và enzyme protease .....................................7
2.2.
2.3.1. Enzyme amylase ...................................................................................7
Lịch sử nghiên cứu ........................................................................7
2.3.1.1.
Vi sinh vật tạo amylase ..................................................................7
2.3.1.2.
Đặc tính của amylase .....................................................................8
2.3.1.3.
vi
- Sinh tổng hợp amylase ở vi sinh vật ............................................10
2.3.1.4.
Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình sinh tổng hợp amylase .......10
2.3.1.5.
Ứng dụng amylase vi sinh vật .....................................................11
2.3.1.6.
2.3.2. Enzyme protease .................................................................................11
Nguồn thu nhận enzyme protease................................................11
2.3.2.1.
Đặc điểm và tính chất của protease vi sinh vật ...........................12
2.3.2.2.
Chức năng sinh học của protease vi sinh vật ...............................13
2.3.2.3.
Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình sinh tổng hợp protease của
2.3.2.4.
vi sinh vật .....................................................................................................14
Ứng dụng protease vi sinh vật ....................................................14
2.3.2.5.
Giới thiệu về probiotic................................................................................15
2.3.
Định nghĩa ...........................................................................................15
2.4.1.
Chức năng sinh học .............................................................................15
2.4.2.
Một số chế phẩm probiotic thông dụng ..............................................15
2.4.3.
Tình hình nghiên cứu và ứng dụng chế phẩm có vi khuẩn
2.4.
Bacillus subtilis .....................................................................................................16
Chƣơng 3: NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ..........................18
Thời gian và địa điểm thực hiện đề tài .......................................................18
3.1.
Thời gian .............................................................................................18
3.1.1.
Địa điểm ..............................................................................................18
3.1.2.
Vật liệu thí nghiệm .....................................................................................18
3.2.
Đối tượng khảo sát ..............................................................................18
3.2.1.
Thiết bị và dụng cụ thí nghiệm ...........................................................18
3.2.2.
Thiết bị .........................................................................................18
3.2.2.1.
Dụng cụ: ......................................................................................18
3.2.2.2.
Nội dung nghiên cứu ..................................................................................19
3.3.
Phương pháp thực hiện đề tài .....................................................................19
3.4.
Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis từ đất ...........................................19
3.4.1.
Cách lấy mẫu đất để phân lập vi khuẩn .......................................19
3.4.1.1.
vii
- Phương pháp phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis........................19
3.4.1.2.
Khảo sát đặc điểm sinh học của vi khuẩn phân lập được ............20
3.4.1.3.
Các thí nghiệm về vi khuẩn Bacillus subtilis ......................................21
3.4.2.
Ảnh hưởng của chế độ sục khí và thời gian nuôi cấy đến khả
3.4.2.1.
năng sinh enzyme của vi khuẩn Bacillus subtilis..........................................21
Ảnh hưởng của môi trường đến hoạt độ enzyme của vi khuẩn
3.4.2.2.
Bacillus subtilis .............................................................................................22
Khảo sát điều kiện (pH, thời gian) thích hợp cho sự sản xuất
3.4.2.3.
enzyme của các chủng Bacillus subtilis. ......................................................23
Thử nghiệm thời gian và nhiệt độ bảo quản chế phẩm từ Bacillus
3.4.3.
subtilis .............................................................................................................25
Quy trình thực hiện ......................................................................25
3.4.3.1.
Kiểm tra chế phẩm trong thời gian bảo quản ..............................25
3.4.3.2.
Chƣơng 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .............................................................26
Khảo sát đặc điểm của vi khuẩn Bacillus subtilis ......................................26
4.1.
Quan sát đặc điểm khuẩn lạc nghi ngờ là Bacillus subtilis ................26
4.1.1.
Đặc điểm hình thái của vi khuẩn nghi ngờ là Bacillus subtilis..........26
4.1.2.
Khảo sát đặc điểm sinh hóa ................................................................27
4.1.3.
Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng của chế độ sục khí và thời gian nuôi cấy đến
4.2.
khả năng sinh enzyme amylase và protease của các chủng vi khuẩn. ..................29
Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng của môi trường đến hoạt độ enzyme của vi
4.3.
khuẩn Bacillus subtilis ..........................................................................................31
Khảo sát điều kiện (pH, thời gian) thích hợp cho sản xuất enzyme của các
4.4.
chủng Bacillus subtilis ..........................................................................................33
Khảo sát thời gian và nhiệt độ bảo quản chế phẩm sau khi sản xuất .........34
4.5.
Chƣơng 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ ..................................................................36
Kết luận ......................................................................................................36
5.1.
Đề nghị .......................................................................................................36
5.2.
PHỤ LỤC ..................................................................................................................40
viii
- DANH SÁCH CÁC BẢNG
Bảng 3. 1: Bố trí thí nghiệm 1 ...................................................................................21
Bảng 3. 2: Bố trí thí nghiệm 2 ...................................................................................23
Bảng 3. 3: Bố trí thí nghiệm 3 ...................................................................................24
Bảng 4.1: Kết quả thử phản ứng sinh hoá ................................................................ 29
Bảng 4.2: Kết quả thí nghiệm 1 (Bảng phụ lục 1 và 2).............................................29
Bảng 4. 3: Kết quả hoạt độ enzyme trung bình của 9 chủng vi khuẩn thí nghiệm ...31
Bảng 4. 4. Ảnh hưởng của môi trường đến hoạt độ enzyme của vi khuẩn. ..............32
Bảng 4. 5. Khảo sát điều kiện (pH, thời gian) thích hợp cho sản xuất ....................33
Bảng 4.6. Khảo sát thời gian và nhiệt độ bảo quản chế phẩm ..................................34
ix
- DANH SÁCH HÌNH
Hình 2. 1. Vi khuẩn Bacillus subtilis ......................................................................... 3
Hình 4. 1. Đặc điểm khuẩn lạc Bacillus subtilis .......................................................26
Hình 4. 2: Đặc điểm hình thái vi khuẩn Bacillus subtilis .........................................27
x
nguon tai.lieu . vn
