1. Trang Chủ
  2. Khoa học tự nhiên
  3. Khóa luận tốt nghiệp: Khảo sát thành phần hóa học cao ethyl acetate lá cây me rừng phyllanthus emblica

Khóa luận tốt nghiệp: Khảo sát thành phần hóa học cao ethyl acetate lá cây me rừng phyllanthus emblica

Nhằm đóng góp một phần hiểu biết thêm về thành phần hóa học của cây thuốc dân gian, tác giả thực hiện đề tài “Khảo sát thành phần hóa học cao ethyl acetate lá cây me rừng”. Hi vọng với đề tài này có thể đóng góp một phần nhỏ những chứng cứ khoa học có giá trị vào kho dược liệu của Y học dân tộc Việt Nam. BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HÓA HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CAO ETHYL ACETATE LÁ CÂY ME RỪNG PHYLLANTHUS EMBLICA Giảng v

Thể loại Tài liệu miễn phí Khoa học tự nhiên

Số trang 41

Ngày tạo 4/2/2023 8:41:01 PM +00:00

Loại tệp PDF

Kích thước 0.98 M

Tên tệp

Tải Khóa luận tốt nghiệp: Khảo sát thành phần hóa học ... (.pdf)

Xem mẫu

  1. BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HÓA HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CAO ETHYL ACETATE LÁ CÂY ME RỪNG PHYLLANTHUS EMBLICA Giảng viên hướng dẫn : TS. Nguyễn Thị Ánh Tuyết Sinh viên thực hiện : Bùi Thị Hồng Lĩnh Mã số sinh viên : K38.201.062 Tp Hồ Chí Minh, tháng 5 năm 2016
  2. NHẬN XÉT CỦA HỘI ĐỒNG: ............................................................................................. ............................................................................................. ............................................................................................. ............................................................................................. ............................................................................................. ............................................................................................. ............................................................................................. ............................................................................................. ............................................................................................. ............................................................................................. ............................................................................................. ............................................................................................. ............................................................................................. ............................................................................................. ............................................................................................. ............................................................................................. ............................................................................................. ............................................................................................. .............................................................................................
  3. Khóa luận tốt nghiệp Bùi Thị Hồng Lĩnh LỜI MỞ ĐẦU Ngày nay cùng với sự phát triển kinh tế xã hội, chất lượng cuộc sống ngày càng cao, con người càng quan tâm hơn đến việc chăm sóc sức khoẻ. Thế nhưng bệnh tật không vì thế mà giảm đi, tỷ lệ mắc bệnh tăng lên từng ngày xuất phát từ nhiều nguyên nhân do ô nhiễm môi trường, do hóa chất trong thực phẩm, hay cũng có thể do di truyền và nhiều nguyên nhân khác… Trước tình trạng đó, nhiều quốc gia trên thế giới đã tiến hành tìm kiếm các loại thuốc có nguồn gốc từ thiên nhiên với hi vọng những tìm ra những hợp chất mới có thể trị bệnh một cách an toàn, thân thiện với sức khỏe con người. Việt Nam nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới nên được thừa hưởng nguồn thiên nhiên vô cùng phong phú với nhiều loài dược liệu quí. Các hợp chất thiên nhiên thể hiện hoạt tính sinh học rất đa dạng nên là một trong những định hướng để nghiên cứu, chiết xuất và tìm ra các loại thuốc mới bằng con đường tổng hợp. Nhằm đóng góp một phần hiểu biết thêm về thành phần hóa học của cây thuốc dân gian, chúng tôi thực hiện đề tài “Khảo sát thành phần hóa học cao ethyl acetate lá cây me rừng”. Me rừng là một loài cây mà hầu hết các bộ phận rễ, thân, lá, hoa, quả, hạt đều có thể dùng làm thuốc trị bệnh. Rễ me rừng trị viêm ruột, đau bụng đi ngoài, cao huyết áp, hạt được sử dụng để trị hen hay viêm khí quản, lá dùng làm thuốc trị phù thũng, viêm da mẩn ngứa, eczema hay dùng nấu nước tắm rửa phòng trị bệnh ngoài da, quả me cũng được chế thành thuốc long đờm, hạ nhiệt, lợi niệu, trị tiêu chảy, chống bệnh thiếu vitaminC…. Hi vọng với đề tài này có thể đóng góp một phần nhỏ những chứng cứ khoa học có giá trị vào kho dược liệu của Y học dân tộc Việt Nam. 1
  4. Khóa luận tốt nghiệp Bùi Thị Hồng Lĩnh Chương I TỔNG QUAN 1.1. ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT Me rừng còn gọi là chùm ruột núi hay du cam tử, ngưu cam tử, dư cam tử Tên khoa học: Phyllanthus emblica Linn Thuộc họ thầu dầu Euphorbiaceae. [1] Hình 1.1 Cây me rừng Hình 1.2 Quả me rừng Cây me rừng phân bố chủ yếu ở những khu vực nhiệt đới và cận nhiệt đới của Trung Quốc, Ấn Độ, Indonesia và Malaysia. Ở nước ta, cây me rừng mọc phổ biến trên các đồi trọc, các bãi hoang, trong các rừng thưa [1]. Me rừng là cây ưa ánh sáng, chịu được khô hạn, cây nhỡ cao 3m, phân nhiều cành nhỏ mềm, có lông, dài 20cm. Hoa nhỏ, cụm hoa thành xim co mọc ở nách lá phía dước của cành, gồm rất nhiều hoa đực và vài hoa cái. Hoa mọc từ tháng 3 đến tháng 11. Lá xếp thành hai dãy trên các cành nhỏ trông giống một lá kép lông chim, cuống lá rất ngắn. Lá kèm rất nhỏ hình ba cạnh. Quả hình cầu trước mọng, sau khô thành quả nang, hạt hình ba cạnh, màu hồng nhạt[1]. 1.2. CÁC NGHIÊN CỨU VỀ DƯỢC TÍNH 1.2.1 Dược tính theo y học cổ truyền Ở Việt Nam: 2
  5. Khóa luận tốt nghiệp Bùi Thị Hồng Lĩnh Quả có vị chua, ngọt, đắng, tính mát, có tác dụng nhuận phế, hóa đờm, sinh tân, chữa cảm, phát sốt ho, đau cổ họng [1]. Rễ có tác dụng trị viêm ruột, đau bụng đi ngoài, cao huyết áp: ngày dùng 15-20g rễ sắc uống [1]. Lá có tác dụng trị lở loét, mẩn ngứa [1]. Ở Ấn Độ: Cây me rừng là một trong những loài thảo dược được sử dụng phổ biến ở Ấn Độ và được coi như một nguồn cung cấp vitamin C. Quả tươi là một vị thuốc mát, lợi tiểu, nhuận tràng , quả khô dùng chữa lỵ, ỉa chảy. Cây có tác dụng hạ men gan, tăng hấp thụ thức ăn, cân bằng lượng acid trong dạ dày, tăng cường phổi và hệ miễn dịch, kích thích nhuận tràng, hỗ trợ hệ tiết niệu, tốt cho da, mắt và tóc.[3] 1.2.2 Một số nghiên cứu về dược tính + Hoạt tính kháng herpes simplex virus (HSV) loại 1 và loại 2. Năm 2011, Yangfei Xiang và các cộng sự [16] đã thử nghiệm khả năng kháng viêm nhiễm HSV-1 và HSV-2 của hợp chất 1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-D-glucose (1246TGG) (62) được cô lập từ cây me rừng. Kết quả cho thấy 1246TGG ở nồng độ 31,70 µM có khả năng ức chế sự phát triển của virus Herpes và có thể được dùng trong điều trị HSV. + Tác dụng gây độc tế bào ung thư. Năm 2011, Xiaoli Liu cùng với các cộng sự [15] đã tiến hành nghiên cứu khả năng điều hòa miễn dịch và gây độc tế bào ung thư của một số hợp chất phenol được cô lập từ quả me rừng. Kết quả cho thấy hai hợp chất isocorilagin (49) và geraniin (50) có khả năng gây độc tế bào ung thư vú (MCF-7) ở người với IC 50 lần lượt là 13,2 và 80,9 µg/ml. Ngoài ra, isocorilagin (49) còn có tác dụng gây độc tế bào ung thư phổi (HELF) ở người với IC 50 51,4 µg/ml. + Tác dụng phục hồi tổn thương tinh hoàn do tác dụng phụ của thuốc động kinh. 3
  6. Khóa luận tốt nghiệp Bùi Thị Hồng Lĩnh Valproic acid được sử dụng rộng rãi trong điều trị bệnh động kinh nhưng lại gây tác dụng phụ ảnh hưởng đến khả năng sinh sản của nam giới. Theo nghiên cứu vào năm 2015 của Sitthichai Iamsaard và các cộng sự [9], dịch chiết từ cành me rừng có tác dụng cải thiện nồng độ tinh dịch của chuột đực đã được tiêm valproic acid. + Hoạt tính kháng khuẩn, kháng oxi hóa. Theo các nghiên cứu vào năm 2007 của Xiaoli Liu cùng các cộng sự [14] và nghiên cứu vào năm 2010 của Wei Luo cùng các cộng sự [11], một số hợp chất phenol như 3-O-galloyl mucic acid 1,4-lactone (29), kaempferol 3-β-D-glucopyranoside (46), kaempferol (47), quercetin (48), isocorilagin (49), geraniin (50) isomallotusinin (59), chebulagic acid (60), chebulanin (61) được cô lập chủ yếu từ vỏ và quả me rừng có các tác dụng kháng khuẩn, kháng oxi hóa hiệu quả. + Tác dụng phục hồi chức năng gan và hạ men gan Theo nghiên cứu do Sharma Bhawna và các cộng sự thực hiện vào năm 2010 [8], dịch chiết ethanol của cây me rừng có tác dụng hạ men gan, phục hồi chức năng của tế bào gan với liều lượng 75mg/kg/ngày khi thử nghiệm trên chuột. 1.3. CÁC NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HOÁ HỌC Các nghiên cứu từ năm 1998 trở về trước cho thấy trong cây me rừng có các hợp chất: zeatin (1), zeatin nucleotide (2), zeatin riboside (3), chebulic acid (4), chebulinic acid (5), corilagin (6), 3,6-di-O-galloyl glucose (7), gallic acid (8), ethyl gallate (9), gluco-gallin (10), ellagic acid (11), gibberellin (A1, A3, A4, A7, A9) (12-16), leucodelphinidin (17), rutin (18), β-sitosterol (19) [4]. NH OH N N OH N N N N O N N OH N HO P O O H NH OH O N N HO N H N OHOH HO OH (1) (2) (3) 4
  7. Khóa luận tốt nghiệp Bùi Thị Hồng Lĩnh RO OR OR OR O HO O O O O O O O O HOOC O OH HO O HO HO HO COOH O O OH HO OH OH HO OH OH OH HOOC R=Galloyl R=Galloyl COOH (4) (5) (6) O OR OH RO HO O O OH HO OH HO RO HO OR OH OH OH R=Galloyl (8) R=H R=Galloyl (7) (9) R=C2H5 (10) O O O OH O OH H H O R2 HO O OH O O HO OH H H R1 R HO O (12) R1=R2=OH (13) R=OH O (14) R1=H, R2=OH (15) R=H (11) (16) R1=R2=H OH OH OH HO O OH H HO O OH OR H OH OH O H H OH OH R=Rha-glu HO H (17) (18) (19) Từ 1999-2001, Ying-Jun Zhang và các cộng sự đã nghiên cứu thành phần từ các bộ phận khác nhau của cây me rừng. Kết quả cho thấy nhóm tác giả đã cô lập và nhận danh các hợp chất sau: phyllaemblic acid (20), các phyllaemblicin A-C (21-23), sáu hợp chất phenolic mới là 2-O-galloyl L-malic acid(24), 2-O-galloyl mucic acid (25) và ba dẫn xuất methyl ester (26-28), 2-O-galloyl mucic acid 1,4-lactone (29) cùng dẫn xuất methyl ester (30), 5-O-galloyl mucic acid 1,4-lactone (31) cùng dẫn xuất methyl ester (32), 3-O- 5
  8. Khóa luận tốt nghiệp Bùi Thị Hồng Lĩnh galloyl mucic acid 1,4-lactone (33), và 3,5-di-O-galloyl mucic acid 1,4-lactone (34), phyllaemblic acid B (35) và phyllaemblic C (36), phyllaemblicin D (37), cùng với hai hợp chất mới, 2-carboxylmethylphenol 1-O-β-D-glucopyranoside (38) và 2,6-dimethoxy- 4-(2-hydroxyethyl)phenol 1-O-β-D-glucopyranoside (39), các phyllanemblinin A-F (40- 45) [10, 17, 18, 20, 21]. O O O HO O O O O HO O O OH O OH OH HO O O O HO OH O OH (20) (21) O O O HO O O O O HO O O OH O OH OH OH O HO HO O HO HO O O O HO O HO O HO OH HO O O HO O O O HO OH HO OH (22) (23) ORH H OH HOOC COOH R1OOC COOR2 H RO H OHOHH R=Galloyl R=Galloyl (25) R1=R2=H (24) (26) R1=R2=CH3 (27) R1=H, R2=CH3 (28) R1=CH3, R2=H H OR3 O OR4 RO H O O HO R1O O H R1O OR2 O = HO OH 29 ( ) 1R Galloyl, R2=R3=R4=H (30) R1 G yl, R2=R3=H, R4=CH3 = allo R=Galloyl (33) R1=R3=R4=H, R2=G (31) R1=H (34) R1=R4=H, R2=R3=G (32) R1=CH3 6
  9. Khóa luận tốt nghiệp Bùi Thị Hồng Lĩnh OH OH H O HO H OH OR2 R1 O COOH O O HOOC OR OR (35) R1=OH, R2=H (36) R1=R2=H R=Glu R=Glu (37) R1=H, R2=Glu (38) (39) HO OH HO OH HO OH HO HO O OR HO O OH O OG OR O O O O O O O O O O O O O O O O HO OH H HO OH HOOC OH HO O HO OH HO O OH H HO O COOH OH R=Galloyl R=Galloyl R=Galloyl (40) (41) (42) OR4 R3O O OR1 R2O OH (43) R1=Galloyl, R2=neoche, R3=R4=H (44) R1=Galloyl, R2=H, R3=neoche, R4=H (45) R1=Galloyl, R2=R3=H, R4=neoche Năm 2007, Xiaoli Lin cùng các cộng sự đã cô lập được 5 hợp chất từ cây me rừng, bao gồm: kaempferol 3-β-D-glucopyranoside (46), kaempferol (47), quercetin (48), isocorilagin (49) và geraniin (50) [14]. Cũng vào năm này, hợp chất mới phyllanthunin (51) cũng đã được cô lập cùng với các hợp chất đã biết: daucosterol (52), stearic acid (53), lauric acid (54), cinnamic acid (55) [2]. 7
  10. Khóa luận tốt nghiệp Bùi Thị Hồng Lĩnh HO OH R O OH HO HO O O HO O HO HO O O HO O OR OH O OH OH O O OH OH O HO HO HO OH HO (47) R=H R=Galloyl (46) (48) R=OH (49) HO OH HO OH HO OH O O OR O O OH OR O OH O O O O O OH O O O O O O H O OH HO HO O OH HO O HO OHOH OH OH O OH R=Galloyl R=Galloyl (50) (51) H O OH H H COOH R OH HO O O HO (53) R=n-C17H35 OH (54) R=n-C11H23 (52) (55) Năm 2008, S. K. EL-DESOUKY và cộng sự đã cô lập được hợp chất mới là acylated apigenin glucoside (apigenin-7-O-(6”-butyryl-β-glucopyranoside)) (56) và các hợp chất khác như 1,2,3,4,6-penta-O-galloyglucose (57). Xiaoli Liu và các cộng sự đã cô lập thêm quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside (58) [7, 13]. 8
  11. Khóa luận tốt nghiệp Bùi Thị Hồng Lĩnh OH OH O HO O O O OH OR OH OO HO O OH O O O HO HO RO OH RO OR OR OH HO OH O R=Galloyl (57) (58) (56) Từ vỏ quả me rừng, năm 2011, Wei Lou và các cộng sự đã cô lập được isomallotusinin (59), chebulagic acid (60), chebulanin (61) [10] Hợp chất 1,2,4,6-tetra-O- galloyl-β-D-glucose (62) đã được cô lập từ lá và cành của cây me rừng bởi Yangfei Xiang và các cộng sự vào năm 2011 [16]. HO OH HO OH HO OH HO OH HO OH HO OH O HO O O O OR OR OR OH O O O O O O O O O O O O O O O HOOC O HOOC O O O HO HO HO OH O O OH O O OH O HO OH OH OH R=Galloyl R=Galloyl R=Galloyl (59) (60) (61) RO RO O OR HO OR R=Galloyl (62) Năm 2012, Wei-Yan Qi và cộng sự đã cô lập được β-sitosterol (19), daucosterol (52), cùng 12 hợp chất sterol khác (63-74), trong đó có 2 hợp chất sterol mới là 5α,6β,7α- trihydroxysitosterol (64) và 7α-acetoxysitosterol (65) từ cành và lá của cây me rừng [12]. 9
  12. Khóa luận tốt nghiệp Bùi Thị Hồng Lĩnh H H R1 HO R2 HO R OH (65) R1=H, R2=CH3COO OH (66) R1=H, R2=OH (63) R=H (67) R1=CH3CH2O, R2=H (64) R=OH (68) R1=R2=O H H O R1 R2 HO (69) R1=R2=H OH (70) R1=R2=O (71) R1=H, R2=OH (72) H R2 HO O O R1 HO OH (73) R1=H, R2=CH3-(CH2)14COO (74) R1=OH, R2=CH3-(CH2)14COO 10
  13. Khóa luận tốt nghiệp Bùi Thị Hồng Lĩnh Chú thích: O O HO OH H HOOC H OH O HO OH HOOC Ac=Acetyl OH HO O G=Galloyl neoche OH OH HO OH O O O HO HO OH O Glu=Glucopyranosyl HO HO OH Rha-Glu=α-L-rhamnopyranosyl (1→6) -O-β-D-glucopyranosyl 11
  14. Khóa luận tốt nghiệp Bùi Thị Hồng Lĩnh CHƯƠNG II THỰC NGHIỆM 2.1. HOÁ CHẤT, THIẾT BỊ, PHƯƠNG PHÁP 2.1.1. Hoá chất  Silica gel 0,04-0,06 mm, Merck và silica gel 0,04-0,06 mm, Himedia dùng cho sắc kí cột.  Sắc ký lớp mỏng loại 25DC – Alufolein 20×20, Kiesel gel 60F , Merck. 254  Sắc ký lớp mỏng loại 25DC, RP-18, Merck.  Dung môi dùng cho quá trình thí nghiệm gồm: hexane, ethyl acetate, acetone, acetic acid, ethanol, methanol.  Thuốc thử hiện hình các vết chất hữu cơ trên lớp mỏng: sử dụng H 2 SO 4 20%. 2.1.2. Thiết bị  Các thiết bị dùng để giải ly, dụng cụ chứa mẫu.  Các cột sắc ký.  Máy cô quay chân không.  Bếp cách thuỷ.  Đèn soi UV: bước sóng 254 nm.  Cân điện tử Sartorius Mass 620g. 2.1.3. Phương pháp tiến hành 2.1.3.1. Phương pháp phân lập các hợp chất Sắc kí cột silica gel pha thường và sắc kí lớp mỏng. Hiện hình sắc ký lớp mỏng bằng đèn tử ngoại ở hai bước sóng 254 nm hoặc dùng thuốc thử là dung dịch H 2 SO 4 20%. 2.1.3.2. Phương pháp xác định cấu trúc hoá học các hợp chất Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR (500 MHz), 13C-NMR (125 MHz) và 2D- NMR được ghi trên máy Bruker Avance tại Phòng thí nghiêm phân tích trung tâm, Đại học Khoa Học Tự Nhiên, 227 Nguyễn Văn Cừ, Q5, Tp.HCM. 12
  15. Khóa luận tốt nghiệp Bùi Thị Hồng Lĩnh 2.2. NGUYÊN LIỆU 2.2.1. Thu hái nguyên liệu Mẫu được dùng trong nghiên cứu khoá luận là lá cây me rừng được thu hái tại Bình Thuận vào tháng 5/2014. Mẫu cây đã được TS. Phạm Văn Ngọt nhận danh tên khoa học là Phyllanthus emblica Linn, họ thầu dầu ( Euphorbiaceae). 2.2.2. Xử lý mẫu nguyên liệu Mẫu nguyên liệu được rửa sạch, loại bỏ phần sâu bệnh, phơi khô trong bóng râm, rồi xay thành bột mịn. Sau đó tiến hành ngâm chiết và phân lập các hợp chất. 2.3. ĐIỀU CHẾ CÁC LOẠI CAO Lá me rừng được phơi khô, chặt nhỏ và nghiền thành bột mịn, sấy khô đến khối lượng không đổi (m =7,2 kg). Nguyên liệu bột mịn được tận trích với ethanol 960 bằng phương pháp ngâm dầm, lọc và cô quay loại dung môi dưới áp suất thấp thu được cao ethanol thô (285,5 g). Cao ethanol thô được chiết lỏng – lỏng lần lượt với hexane, ethyl acetate thu được cao hexane (22,1 g), cao ethyl acetate (143,1 g) và phần cao còn lại (77,1 g). Quá trình thực hiện được tóm tắt theo sơ đồ 2.1. 13
  16. Khóa luận tốt nghiệp Bùi Thị Hồng Lĩnh Sơ đồ 2.1. Qui trình điều chế các loại cao Bột lá me rừng ( 7,2 Kg) o - Ngâm trong ethanol 96 - Lọc Bã khô Dịch ethanol - Cô quay thu hồi dung môi Ethanol thu hồi Cao ethanol (285,5 g) - Chiết lỏng – lỏng với hexane, ethyl acetate - Cô quay thu hồi dung môi Cao hexane lá me Cao ethyl acetate lá me Cao còn lại (22,1 g) (143,1 g) (77,1 g) 2.4 CÔ LẬP CÁC HỢP CHẤT HỮU CƠ TRONG CAO ETHYL ACETATE LÁ ME RỪNG Cao ethyl acetate được SKC silica gel giải ly với hệ dung môi H: EA (80% đến 100% EA) và tiếp tục với hệ dung môi EA: Me (5% đến 100% Me). Dịch giải ly qua cột được hứng vào các lọ. Theo dõi quá trình giải ly bằng sắc kí lớp mỏng. Những lọ cho kết quả sắc kí lớp mỏng giống nhau được gộp chung thành 1 phân đoạn. Kết quả thu được 5 phân đoạn (EA1-EA5). Quá trình thực hiện được trình bày trong bảng 2.1 14
  17. Khóa luận tốt nghiệp Bùi Thị Hồng Lĩnh Bảng 2.1. Sắc kí cột silica gel trên cao ethyl acetate lá me (143,1g). Trọng Phân Sắc kí lớp STT Dung môi giải ly lượng Ghi chú đoạn mỏng (g) 1 EA1 H:EA 2:8 16,50 Vệt dài Khảo sát 2 EA2 EA 13,28 Nhiều vết Chưa khảo sát Nhiều vết 3 EA3 EA:Me 95:5 22,25 Đã khảo sát kéo vệt 4 EA4 EA:Me 8:2 33,40 Nhiều vết Khảo sát 5 EA5 EA:Me 7:3 14,70 Nhiều vết Chưa khảo sát Ghi chú: H (hexane), EA (ethyl acetate), Me (methanol) 2.4.1 SẮC KÍ CỘT SILICA GEL TRÊN PHÂN ĐOẠN EA1 (16,50 g) Tiến hành sắc kí cột silica gel trên phân đoạn EA1 (16,50 g) bằng hệ dung môi C:Me (0% đến 20% Me), sau đó chuyển sang hệ dung môi EA:Me (5% đến 100% Me) thu được 10 phân đoạn, kí hiệu từ EA1.1 đến EA1.10. Trong phân đoạn EA1.9 cho kết quả sắc kí lớp mỏng có sự tách vết màu vàng rõ ràng. Tiếp tục sắc kí cột pha thường trên phân đoạn EA1.9 nhiều lần, thu được hợp chất ở dạng bột màu vàng, kí hiệu là PAL3. Hợp chất PAL3 có khối lượng 25mg (hệ dung môi H: Ac: AcOH 6:4:0,2 màu vàng khi hiện hình bằng thuốc thử H 2 SO 4 20%). Kết quả được trình bày trong bảng 2.2, 2.3. Bảng 2.2. Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn EA1 (16,50 g) của bảng 2.1. Trọng Phân Sắc kí lớp STT Dung môi giải ly lượng Ghi chú đoạn mỏng (g) 1 EA1.1 C 0,39 Nhiều vết Khảo sát 2 EA1.2 C 0,32 Nhiều vết Chưa khảo sát 3 EA1.3 C 0,31 Nhiều vết Chưa khảo sát 4 EA1.4 C : Me 9:1 0,38 Vệt dài Chưa khảo sát 5 EA1.5 C : Me 9:1 0,32 Vệt dài Chưa khảo sát 6 EA1.6 C : Me 9:1 0,22 Vệt dài Chưa khảo sát 7 EA1.7 C : Me 85:15 0,24 Vệt dài Chưa khảo sát 8 EA1.8 C : Me 85:15 0,31 Vệt dài Chưa khảo sát 9 EA1.9 C : Me 8:2 9,73 Vết rõ ràng Khảo sát 10 EA1.10 C : Me 8:2 0,83 Nhiều vết Chưa khảo sát Ghi chú: C (chloroform) 15
  18. Khóa luận tốt nghiệp Bùi Thị Hồng Lĩnh Bảng 2.3. Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn EA1.9 của bảng 2.2. Trọng Phân STT Dung môi giải ly lượng Sắc kí lớp mỏng Ghi chú đoạn (g) 1 EA1.9.1 DCM:Me 95:5 0,41 Vết mờ Khảo sát 2 EA1.9.2 DCM:Me 95:5 0,65 Nhiều vết Đã khảo sát 3 EA1.9.3 DCM:Me 95:5 0,54 Nhiều vết Đã khảo sát 4 EA1.9.4 DCM:Me 9:1 1,57 Nhiều vết Chưa khảo sát 5 EA1.9.5 DCM:Me 9:1 1,51 Vết rõ ràng Chưa khảo sát Khảo sát thu 6 EA1.9.6 DCM:Me 9:1 0,40 Vết rõ ràng được PAL3 7 EA1.9.7 DCM:Me 9:1 1,62 Nhiều vết Chưa khảo sát Ghi chú: DCM (dichloromethane) 2.4.2 SẮC KÍ CỘT SILICAGEL TRÊN PHÂN ĐOẠN EA4 (33,40 g) Tiến hành sắc kí cột silica gel trên phân đoạn EA4 (33,40 g) bằng hệ dung môi H:EA (75% đến 100% EA) sau đó chuyển sang hệ dung môi EA:Me (5% đến 40% Me) thu được 8 phân đoạn, kí hiệu từ EA4.1 đến EA4.8. Trong phân đoạn EA4.7 cho kết quả sắc kí lớp mỏng có sự tách vết màu vàng rõ ràng. Tiếp tục sắc kí cột pha thường trên phân đoạn EA4.7 nhiều lần, thu được hợp chất không màu, kí hiệu là PAL4. Hợp chất PAL4 có khối lượng 7mg (hệ dung môi H: Ac: AcOH 6:4:0,2 màu vàng khi hiện hình bằng thuốc thử H 2 SO 4 20%). Kết quả được trình bày trong bảng 2.4, 2.5. Bảng 2.4. Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn EA4 (33,40 g) của bảng 2.1. Trọng Phân Sắc kí lớp STT Dung môi giải ly lượng Ghi chú đoạn mỏng (g) 1 EA4.1 H:EA 1:3 4,67 Vệt dài Đã khảo sát Nhiều vết 2 EA4.2 H:EA 1:3 3,78 Chưa khảo sát kéo vệt Nhiều vết 3 EA4.3 H:EA 1:9 2,52 Chưa khảo sát kéo vệt 4 EA4.4 H:EA 1:9 2,75 Vệt dài Chưa khảo sát 5 EA4.5 EA 1,59 Vệt dài Đã khảo sát 6 EA4.6 EA:Me 95:5 1,86 Kéo vệt Chưa khảo sát Có vết 7 EA4.7 EA:Me 85:15 3,40 Khảo sát tách rõ 8 EA4.8 EA:Me 6:4 2,80 Kéo vệt Chưa khảo sát 16
  19. Khóa luận tốt nghiệp Bùi Thị Hồng Lĩnh Bảng 2.5. Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn EA4.7 (3,40 g) của bảng 2.4 Trọng Phân Sắc kí lớp STT Dung môi giải ly lượng Ghichú đoạn mỏng (g) 1 EA4.7.1 H:Ac 4:1 0,16 Vệt dài Chưa khảo sát 2 EA4.7.2 H:Ac 4:1 0,24 Nhiều vết Chưa khảo sát Khảo sát thu 3 EA4.7.3 H:Ac 3:2 0,8 Nhiều vết được PAL4 4 EA4.7.4 H:Ac 3:2 1,20 Vệt dài Chưa khảo sát 17
  20. Khóa luận tốt nghiệp Bùi Thị Hồng Lĩnh CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA HỢP CHẤT PAL3 (25 mg) Hợp chất PAL3 thu được sau quá trình sắc kí cột nhiều lần phân đoạn EA1.9.6 của bảng 2.3 có những đặc điểm quan trọng sau: • Hợp chất ở dạng bột màu vàng. • Kết quả sắc kí lớp mỏng giải ly với hệ môi hexane : acetone : acetic acid 6: 4: 0,2; hiện hình bằng thuốc thử H 2 SO 4 20%, đun nóng bảng mỏng thu được 1 vết tròn màu vàng nhạt. • Phổ 1H-NMR (acetone – d 6 , phụ lục 1), δ H ppm: 7,69 (1H, dd, H-6’), 6,99 (1H, d, H-5’), 7,82 (1H, d, H-2’), 6,51 (1H, d, H-8), 6,26 (1H, d, H-6), • Phổ 13C-NMR (acetone – d 6 , phụ lục 2), δ C ppm: 176,36 (>C=O) và độ chuyển dịch của các cacbon khác được trình bày trong bảng 3.1. Biện luận cấu trúc: Phổ 1H-NMR của PAL3 xuất hiện tín hiệu cộng hưởng của 5 proton vòng thơm trong vùng δ H 7,82-6,26. Trong đó ở δ H 7,82 (J=2,0 Hz) xuất hiện tín hiệu cộng hưởng của proton bị tách meta, ở δ H 7,69 (J=8,5 Hz) xuất hiện tín hiệu cộng hưởng của proton bị tách ortho và meta. Ngoài ra trên phổ còn xuất hiện tín hiệu cộng hưởng của hai proton khác bị tách meta ở δ H 7,82 (J=2,0 Hz) và 7,69 (J=2,5 Hz). Phổ C-NMR của PAL3 thể hiện tín hiệu cộng hưởng của 15 C trong vùng δ C 13 176,4 -94,3, cho phép dự đoán PAL3 là hợp chất flavon. Trong đó có carbon >C=O cộng hưởng ở δ C 176,4 ppm. Như vậy có thể dự đoán PAL3 là một flavonol. Từ những dữ liệu trên kết hợp so sánh với dữ liệu phổ của quercetin cho thấy sự tương đồng, nên hợp chất PAL3 được đề nghị là quercetin 5' 6' OH 4' 1 8 1' HO 9 O 3' 7 2 2' OH 3 6 10 OH 5 4 OH O Quercetin (PAL3) 18
nguon tai.lieu . vn
Thạc sĩ - Tiến sĩ - Cao học Công nghệ thông tin Kinh tế - Thương mại Tài chính - Ngân hàng Kiến trúc - Xây dựng Điện-Điện tử-Viễn thông Cơ khí - Chế tạo máy Công nghệ - Môi trường Báo cáo khoa học Quản trị kinh doanh Khoa học xã hội Khoa học tự nhiên Nông - Lâm - Ngư Y khoa - Dược