1. Trang Chủ
  2. Công nghệ - Môi trường
  3. Khóa luận tốt nghiệp Công nghệ kỹ thuật hóa học: Xây dựng phương pháp định lượng tannins tổng trong thực vật bằng kỹ thuật đo quang

Khóa luận tốt nghiệp Công nghệ kỹ thuật hóa học: Xây dựng phương pháp định lượng tannins tổng trong thực vật bằng kỹ thuật đo quang

Nội dung nghiên cứu của khóa luận là xây dựng phương pháp định lượng tanin tổng trong thực vật bằng phương pháp đo quang phổ. Xác định giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) của phương pháp. Áp dụng phương pháp đã được xây dựng để định lượng tanin tổng trong một số mẫu cao chiết trà hoa vàng. BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP HÀ NỘI ­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ KỸ THUẬT HÓA HỌC XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG TANNINS TỔNG TRONG

Thể loại Tài liệu miễn phí Công nghệ - Môi trường

Số trang 56

Ngày tạo 4/4/2023 12:18:24 AM +00:00

Loại tệp DOCX

Kích thước 0.81 M

Tên tệp

Tải Khóa luận tốt nghiệp Công nghệ kỹ thuật hóa học: X... (.pdf)

Xem mẫu

  1. BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP HÀ NỘI ­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ KỸ THUẬT HÓA  HỌC   XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG TANNINS TỔNG TRONG  THỰC VẬT BẰNG KỸ THUẬT ĐO QUANG                                     Cán bộ hướng dẫn  : PGS. TS. NGUYỄN TIẾN ĐẠT                                                       TS. TRẦN QUANG HẢI                   Sinh viên thực hiện : PHẠM THỊ HOA                   Mã sinh viên            : 1141120183                   Lớp                           : ĐH CN HÓA HỌC 3 ­ K11
  2. Hà Nội ­ 2020 LỜI CẢM ƠN Trước tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành và sự tri ân sâu sắc đối   với  TS. Trần Quang Hải ­ giảng viên khoa Hóa ­ Trường Đại học Công  Nghiệp Hà Nội đã giúp đỡ em trong quá trình làm khóa luận.
  3. Em xin  gửi lời cảm  ơn  sâu sắc đến  PGS. TS. Nguyễn Tiến Đạt  ­  Trung tâm Nghiên cứu và Chuyển giao công nghệ, Viện Hàn Lâm Khoa học  và Công nghệ  Việt Nam đã hết lòng hướng dẫn, chỉ  bảo, truyền đạt kiến  thức kinh nghiệm quý báu cho em. Cảm  ơn gia đình, tất cả  bạn bè đã luôn  ủng hộ, giúp đỡ  và là chỗ  dựa tinh thần, nguồn động viên cho em trong những lúc khó khăn. Trong quá trình làm báo cáo này mặc dù đã được sự giúp đỡ tận tình   và hết sức cố gắng nhưng do trình độ và thời gian nghiên cứu còn hạn chế  nên không thể  tránh được những thiếu sót. Vì vậy, em kính mong nhận   được ý kiến đóng góp chỉ bảo của các quý thầy cô.                                                                   Em xin chân thành cảm ơn!                                                                Hà Nội, ngày 28 tháng 5 năm 2020                                                                                    Sinh viên                                                                                Phạm Thị Hoa
  4. MỤC LỤC                                             LOD:  Giới hạn phát hiện (Limit of detection) LOQ: Giới hạn định lượng (Limit of quantitation) HPLC:   Sắc   ký   lỏng   hiệu   năng   cao   (High   ­   performance   liquid  chromatography) UV: Tử ngoại VIS: Khả kiến ACN: Acetonitril TFA: Trifluoroacetic AOAC:  Hiệp  hội   các  nhà  hóa học  phân tích  chính thức  (Association  of   Official Analytical Chemists). MeOH: Methanol
  5. DANH MỤC HÌNH ẢNH
  6. DANH MỤC BẢNG BIỂU
  7. Khoa Công nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp MỞ ĐẦU Việt Nam là một nước có thảm thực vật đa dạng và phong phú với   nhiều loài thực vật, được sử  dụng trong phòng và điều trị  bệnh, cũng như  bổ  dưỡng nâng cao sức khỏe cho con người. Có nhiều loài thực vật được  ví như là một loại dược liệu được dùng phổ biến trong y học dân gian làm  thuốc. Các nghiên cứu cho thấy, tanin có trong nhiều loài thực vật như: ổi,  chè xanh, măng cụt... Tanin có nhiều hoạt tính sinh học như: hoạt tính  kháng khuẩn, kháng nấm, chống khối u, kháng virut... nên nó được  ứng  dụng khá rộng rãi trong y học hiện đại ngày nay. Ngày nay, để xác định hàm lượng của các chất trong nhiều loài thực  vật, nhiều kỹ  thuật phân tích mới và hiện đại như  quang phổ  UV ­ Vis,  HPLC, quang phổ  đạo hàm… đã được áp dụng vào việc phân tích. Trong  đó, quang phổ UV ­ Vis là phương pháp được sử dụng rộng rãi vì nó có độ  nhạy cao, phân tích thuận tiện. Song song với việc tìm ra các kĩ thuật mới thì việc kiểm tra lại giá trị  của phương pháp phân tích với mục đích đảm bảo độ chính xác, độ tin cậy   của số liệu phân tích và tăng tính ứng dụng của phương pháp đó trong thực  tiễn cũng rất quan trọng. Vì vậy, tôi chọn đề tài “Xây dựng phương pháp   định lượng tannins tổng trong thực vật bằng kỹ thuật đo quang’’. Mục tiêu của đề tài: Xây dựng phương pháp và định lượng tanin tổng  trong một số mẫu cao chiết từ thực vật bằng phương pháp đo quang phổ.  Nội dung nghiên cứu: ­ Xây dựng phương pháp định lượng tanin tổng trong thực vật bằng   phương pháp đo quang phổ. Xác định giới hạn phát hiện (LOD) và   giới hạn định lượng (LOQ) của phương pháp. SV: Phạm Thị Hoa                  7 MSV:  1141120183
  8. Khoa Công nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp ­ Áp dụng phương pháp đã được xây dựng để  định lượng tanin tổng  trong một số mẫu cao chiết trà hoa vàng. SV: Phạm Thị Hoa                  8 MSV:  1141120183
  9. Khoa Công nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ TANIN 1.1.1 Khái niệm, tính chất [1] * Khái niệm: Tanin được định nghĩa là ‘‘những hợp chất polyphenol có trong thực   vật, có vị  chát được phát hiện dương tính với thí nghiệm thuộc da’’ và   được định lượng dựa vào mức độ hấp phụ trên bột da sống chuẩn. Cơ chế  thuộc da được giải thích do tanin có nhiều nhóm OH phenol, tạo nhiều dây   nối hydro với các mạch polypeptid của protein. Nếu phân tử tanin càng lớn   thì sự kết hợp với protein càng chặt. Khối lượng phân tử dao động từ 5000  ­ 20000 đvc. Hình 1.: Liên kết hidro giữa tanin với protein * Tính chất: Tanin thường là những chất rất phân cực, dễ tan trong dung môi phân  cực   như   cồn,   aceton,   methanol,   propylene   glycon,   glycerin   etylacetat   …   không tan trong các dung môi kém phân cực như: hexan, benzen, dầu hỏa …  1.1.2 Phân loại  Dựa vào cấu trúc hóa học có thể  chia tanin làm 2 loại chính: tanin   thủy phân và tanin ngưng tụ. SV: Phạm Thị Hoa                  9 MSV:  1141120183
  10. Khoa Công nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp 1.1.2.1 Tanin thủy phân [1] Tanin thủy phân được còn được gọi là tanin pyrogallic. Loại này có  những đặc điểm sau: Khi thủy phân bằng axit hoặc bằng enzym tanase thì  giải phóng ra phần đường và phần không đường. Phần đường thường là   glucose, đôi khi gặp đường đặc biệt ví dụ đường hamamelose. Phần không  phải đường là các axit. Axit hay gặp là axit gallic. Các axit gallic nối với  nhau theo dây nối depsid để tạo thành axit m­digallic, m­trigallic v.v... Phần   đường và phần không phải đường nối với nhau theo dây nối este (không   phải   dây   nối   acetal)   nên   người   ta  coi   tanin   loại   này  là   những  pseudo   ­  glycosid.                                                                                                       Axit gallic                                                    Axit m ­ digallic                                                       SV: Phạm Thị Hoa                  10 MSV:  1141120183
  11. Khoa Công nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp Axit m ­ trigallic Hình 1.: Cấu tạo của axit gallic, axit m ­ digallic và axit m ­ trigallic Tính chất đặc trưng của tanin loại này là:  + Khi cất khô ở 180 ­ 200°C sẽ thu được pyrogallol là chủ yếu.  + Khi đun nóng với HCl sẽ cho axit gallic hoặc axit ellargic.  + Cho kết tủa bông với chì axetat 10 %.   + Cho kết tủa màu xanh đen với muối sắt (III).  + Thường dễ tan trong nước.  * Ví dụ  về  cấu trúc của các tanin thủy phân, được phân lập trong  thực vật: Năm 2005, Masturah Markom và các cộng sự đã nghiên cứu phân lập   được 3 loại của tanin thủy phân: axit gallic, axit ellagic, corilagin trong cây  Diệp Hạ Châu (Phyllanthus urinaria) [17].                                                                                                    axit ellagic SV: Phạm Thị Hoa                  11 MSV:  1141120183
  12. Khoa Công nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp corilagin Hình 1.: Cấu tạo của axit ellagic và corilagin 1.1.2.2 Tanin ngưng tụ [1] Tanin ngưng tụ  hay còn được gọi là tanin không thuỷ  phân được,  tanin   pyrocatechic   hay   phlobatanin.   Các   chất   thuộc   nhóm   này   là   những  polyflavonoid thường được tạo thành do sự  ngưng tụ  từ  các đơn vị  flavan  ­3­ol hoặc flavan­3,4­ diol.  Tanin nhóm này có những đặc điểm sau:  ­ Dưới tác dụng của axit hoặc enzym dễ tạo thành chất đỏ tanin hay  phlobaphen. Phlobaphen rất ít tan trong nước là sản phẩm của sự trùng hiệp  hoá kèm theo oxy hoá, do đó tanin nhóm này còn được gọi là phlobatanin.  Phlobaphen là đặc trưng của một số dược liệu như vỏ Canh ki na, vỏ Quế.  ­ Khi cất khô thu được pyrocatechin là chính.  ­ Cho kết tủa màu xanh lá đậm với muối sắt (III).  ­ Cho kết tủa bông với nước brom.  ­ Khó tan trong nước hơn tanin pyrogallic.  SV: Phạm Thị Hoa                  12 MSV:  1141120183
  13. Khoa Công nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp Tanin ngưng tụ  hay gặp trong các chi Acacia, Camellia, Cinchona,   Cinnamomum, Rheum, Salix ...                                flavan ­ 3 ­ ol                                             flavan ­ 3,4 ­ diol  Hình 1.: Cấu tạo của các flavanol * Ví dụ về cấu trúc của các tanin ngưng tụ, được phân lập trong thực  vật: Năm 2000, Kang. J. H và các cộng sự đã nghiên cứu phân lập EGCG   (epigallocatechin gallate) có trong trà xanh (Camellia sinensis), ban đầu loại  bỏ caffein bằng chloroform. Sau đó sử dụng hai cột sắc ký lỏng áp suất cao  (HPLC) chuẩn bị rửa giải bằng hệ dung môi (axit axetic: acetonitril: nước)  để thu được EGCG với độ tinh khiết hơn 98%. [24] SV: Phạm Thị Hoa                  13 MSV:  1141120183
  14. Khoa Công nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp Hình 1.: Cấu tạo của epigallocatechin gallate Năm 2001, Xueli Cao và các cộng sự đã nghiên cứu phân lập được hai   chất:  GCG (Gallocatechin gallate), ECG (Epicatechin  gallate)  từ  trà xanh  (Camellia sinensis) bằng cách sử  dụng sắc ký phân bố  ngược dòng với hai   hỗn   hợp   dung   môi   (ethyl   acetate:   ethanol:   nước;   hexane:   ethyl   acetate:   nước). [25] SV: Phạm Thị Hoa                  14 MSV:  1141120183
  15. Khoa Công nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp Hình 1.: Cấu tạo của epicatechin gallate Hình 1.: Cấu tạo của gallocatechin gallate 1.1.2 Hoạt tính sinh học của tanin Theo các nghiên cứu khoa học của nước ngoài thì tanin là hợp chất có  nhiều hoạt tính sinh học. SV: Phạm Thị Hoa                  15 MSV:  1141120183
  16. Khoa Công nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp 1.1.2.1 Hoạt tính kháng khuẩn Các hoạt tính kháng khuẩn của tanin đã được công nhận từ trước đây   và độc tính của tanin đối với vi khuẩn, nấm và nấm men đã được nhà khoa  học Scalbert nghiên cứu [6]. Các cơ chế được đề xuất cho đến nay để giải  thích hoạt tính kháng khuẩn của tanin bao gồm  ức chế  các enzym của vi   khuẩn ngoại bào, tác động trực tiếp lên quá trình chuyển hóa của vi khuẩn   thông qua sự  ức chế quá trình photphoryl oxy hóa, sự khử ion kim loại gây   ra sự  thay đổi hình thái của tế  bào và tăng tính thấm của màng [7]. Các  bằng chứng đã chỉ ra rằng màng tế bào vi sinh vật là nơi chủ yếu tác động  ức chế của tanin [8]. Do tính kết tủa với protein là một tính chất phổ biến   cho tất cả  các tanin, cho nên hoạt tính kháng vi khuẩn của các loài vi sinh  vật có liên quan chặt chẽ đến thành phần hóa học và cấu trúc của tanin. 1.1.2.2 Hoạt tính kháng vi­rút Tanin đã được các nhà nghiên cứu chứng minh có hoạt tính đáng kể  chống lại một số loại vi­ rút, như  vi­ rút gây suy giảm miễn dịch ở người   (HIV), vi­ rút adeno và norovirus [9]. Vào năm 1991, tác giả G.T. Tan và các  cộng sự  đã chứng minh tanin gây tác dụng  ức chế  HIV­1 bằng cách sao  chép ngược vi­ rút [10]. Đến năm 2011, S. Ciesek và các cộng sự  cũng đã  chứng minh epigallocatechin trong trà xanh  ức chế  được sự  xâm nhập của   vi­ rút viêm gan C [11]. Tanin có nhiều hoạt tính kháng vi­ rút khác nhau tùy  thuộc vào thành phần và cấu trúc hóa học. 1.1.2.3 Hoạt tính chống viêm Tanin có các hoạt tính chống viêm khác nhau. Các nghiên cứu in vitro  của tác giả  X. Terra và các cộng sự  năm 2007, đã chỉ  ra rằng tanin từ  hạt  nho làm giảm bệnh viêm thấp khớp [12]. Đến năm 2014, M. Park và các  cộng sự chứng minh tanin ngưng tụ chiết xuất từ hạt mâm xôi đen có khả  SV: Phạm Thị Hoa                  16 MSV:  1141120183
  17. Khoa Công nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp năng chống viêm, ức chế tế bào RAW 264.7 do lipopolysacarit gây ra trong  quá trình sản xuất NO một chất trung gian gây viêm [13]. 1.1.2.4 Hoạt tính chống oxy hóa Các hợp chất phenolic đã được các nhà khoa học nghiên cứu là chất  chống oxy hóa hiệu quả  [14]. Tanin với hầu hết là các nhóm hydroxyl sẽ  dễ  bị  oxy hóa nhất, do đó chúng sẽ  có hoạt tính chống oxy hóa lớn nhất  [15]. Hoạt tính chống oxy hóa của tanin được ứng dụng rộng rãi trong lĩnh   vực y tế  để  ngăn ngừa các bệnh về  tim mạch, bệnh ung thư, bệnh loãng   xương [16].  1.1.3 Một số phương pháp định lượng tanin  Có nhiều nhà khoa học trên thế  giới tiến hành nghiên cứu để  xác  định hàm lượng tanin trong nhiều đối tượng thực vật khác nhau. Sử  dụng  một  số  phương pháp như: chuẩn  độ,  đo quang, sắc ký lỏng hiệu năng  cao…  1.1.3.1 Phương pháp chuẩn độ [23] Theo phương pháp của AOAC (1980), để  định lượng tanin, phương   pháp được thực hiện như sau: Lấy 5 ml dịch chiết được hòa tan với 12,5 ml  dung dịch indigo­carmin và 375 ml nước. Hỗn hợp được chuẩn độ với dung  dịch KMnO4  làm dung dịch chuyển từ  màu xanh sang màu vàng với màu  hồng nhạt  ở  viền. Thể  tích của dung dịch KMnO4  là tổng thể  tích hàm  lượng tanin bao gồm cả các thành phần khác (Y). Để  xác định thành phần   khác không phải tanin (X), lấy 50ml dung dịch chiết với 25 ml dung dịch   gellatin. Hỗn hợp được làm ấm cho đến khi gellatin được hòa tan hoàn toàn  sau đó được làm lạnh và định mức đến vạch với dung dịch muối bão hòa,  thêm 50 ml dung dịch axit và NaCl bão hòa và 5 g bột cao lanh. Hỗn hợp  được lắc 15 phút và lọc qua màng lọc whatman 1. Lấy 12,5 ml dịch lọc trộn   SV: Phạm Thị Hoa                  17 MSV:  1141120183
  18. Khoa Công nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp với 12,5 ml thể tích dung dịch indigo carmin và 375 ml nước. Chuẩn độ với  dung dịch KMnO4 cho tới khi chuyển thành dung dịch màu hồng nhạt như  trước. Thể  tích của dung dịch KMnO4  thực được sử  dụng để  chuẩn độ  tanin được tính theo giá trị của Y và X:         1mL dung dịch chuẩn KMnO4 = 0,595 ml dung dịch axit oxalic 0,1N        1mL dung dịch axit oxalic 0,1N = 0,0042 g tanin. Năm 2015, tác giả  Jyotismita Khasnabis và các cộng sự  đã tiến hành  xác định hàm lượng tanin trong các loại trà khác nhau bằng phương pháp  chuẩn độ. Mẫu trà được chiết trong nước  ở  nhiệt độ  70oC trong 5 phút.  Dịch chiết được lọc qua màng Whatman.1 và được ly tâm với tốc độ 10000  vòng/15 phút. Dịch lọc được lưu trữ   ở  4 oC để  định lượng bằng phương  pháp chuẩn độ  với dung dịch KMnO4 với chất chỉ  thị  indigo­cacmin. Hàm  lượng tanin trong các loại trà được xác định: mẫu trà đen có hàm lượng   tanin là 13,36%, trà xanh có hàm lượng tanin là 2,65%, trà ô long có hàm  lượng 8,66%. [18] Năm 2009, Maria Atanassova và Valentina Christova­Bagdassarian đã  tiến hành xác định hàm lượng tanin trong các loại thực vật khác nhau bằng  phương pháp chuẩn độ. Các loại mẫu được chiết trong nước cất khử  ion   trong thời gian 4 giờ   ở  nhiệt độ  phòng. Sau đó, tiến hành lọc dịch chiết,   dịch lọc thu được chuẩn độ bằng dung dịch KMnO 4 với chất chỉ thị indigo­ cacmin. Hàm lượng tanin của các loại thực vật lần lượt là: táo (0,58%),   cherry ngọt (1,25%), quả mộc qua (0,67%), hồ tiêu đỏ (0,69%). [26] 1.1.3.2 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao [3] Trong phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao, có 4 phương pháp  định lượng thường dùng: Phương pháp chuẩn ngoại: là phương pháp định lượng cơ bản, trong   đó cả 2 mẫu chuẩn và thử đều được tiên hành sắc ký trong cùng điều kiện.  SV: Phạm Thị Hoa                  18 MSV:  1141120183
  19. Khoa Công nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp Sau đó so sánh diện tích (hoặc chiều cao) pic của mẫu thử  với diện tích  (hoặc chiều cao) pic của mẫu chuẩn sẽ  tính được nồng độ  của các chất   trong mẫu thử.   Phương pháp chuẩn nội: thêm vào cả mẫu chuẩn lẫn mẫu thử những   lượng bằng nhau của một chất tinh khiết, rồi tiến hành sắc ký trong cùng  điều kiện. Chất được thêm này gọi là chuẩn nội. Từ  những dữ  kiện về:   diện tích (hoặc chiều cao) pic và lượng (hoặc nồng độ) của chuẩn, chuẩn  nội và mẫu thử, có thể xác định được hàm lượng của thành phần cần định  lượng trong mẫu thử một cách chính xác.  Phương pháp thêm chuẩn: Thêm vào mẫu thử  những lượng đã biết   của các chất chuẩn tương ứng với các thành phần có trong mẫu thử rồi lại   tiến hành xử  lý mẫu và sắc ký trong cùng điều kiện. Nồng độ  chưa biết   của mẫu 9 thử được tính dựa vào sự chênh lệch nồng độ  lượng chất thêm  vào và sự tăng của diện tích hoặc chiều cao pic.  Phương pháp chuẩn hoá diện tích: Hàm lượng phần trăm của một  chất trong hỗn hợp nhiều thành phần được tính bằng tỷ lệ phần trăm diện   tích pic của nó so với tổng diện tích của tất cả các pic thành phần trên sắc  ký đồ.  Tác giả Trupti P. Durgawale và các cộng sự đã sử dụng phương pháp  HPLC để  xác định hàm lượng tanin trong loài cây họ  Đậu vào năm 2016.  Công trình nghiên cứu sử dụng cột sắc kí C18, hỗn hợp methanol và nước  theo tỉ  lệ  thể  tích 50:50 làm dung môi pha động với pH = 4,5, tốc độ  pha  động là 1,0 ml/phút tại bước sóng 270 nm. Tổng thời gian chạy là 12 phút.  Kết quả thu được thời gian lưu là 3,1 phút. Phương pháp này đã được xác  nhận và tuyến tính của axit tannic trong phạm vi nồng độ 0­60 mg/ml. [19] Tác giả  Tushar Dhanani và các cộng sự  đã sử  dụng phương pháp  HPLC ­ PDA để xác định hàm lượng của 5 loại tanin thủy phân: axit gallic   SV: Phạm Thị Hoa                  19 MSV:  1141120183
  20. Khoa Công nghệ Hóa                                                       Khóa luận tốt   nghiệp (GA),   axit   corilagin  (CL),   axit  chebulagic   (CB),   axit  ellagic   (EA)   và   axit  chebulinic (CN) trong vỏ  quả  cây chiêu liêu vào năm 2014. Công trình sử  dụng cột sắc ký C18, hỗn hợp dung môi ACN (acetonitril) và TFA (0,05%)  trong nước, tốc độ pha động là 1,0 ml/phút tại bước sóng 270 nm. Kết quả  thu được thời gian lưu của 5 loại tanin thủy phân lần lượt là: GA (2,91  phút), CL (12,09 phút), CB (16,12 phút), EA (17,66 phút), CN (18,59 phút).  LOD (giới hạn phát hiện) của GA, CL, CB, EA và CN lần lượt là 1,0; 0,5;   1,0; 0,5 và 1,0 µg/ml. LOQ (giới hạn định lượng) của GA, CL, CB, EA và  CN lần lượt là 2,5; 1,0; 2,5; 1,0 and 2,5 µg/ml. [22] 1.1.3.3 Phương pháp đo quang Tác giả Philip­Edouard Shay và các cộng sự sử dụng phương pháp đo  độ hấp thụ quang với thuốc thử butanol ­ HCl ­ sắt để xác định hàm lượng  tanin ngưng tụ trong các loài thực vật năm 2017. Mẫu khô được chiết bằng  dung   môi   methanol   (300mL)   và   được   axit   hóa   bằng   axit   trifluoroacetic   (TFA) 0,05%. Các bước được tóm tắt như sau: 500 µl dịch mẫu chứa tanin   ngưng tụ  cho tác dụng với 2000µl dung dịch thuốc thử  butanol ­ HCl cho   thêm 67mL thuốc thử  sắt (NH4Fe(SO4)2  2% trong HCl 2N) và để   ủ  trong  khoảng thời gian 2,5h ở nhiệt độ 70°C. Màu của phản ứng được phát hiện  trên máy quang phổ ở bước sóng 550 nm. Hàm lượng tanin ngưng tụ được  định lượng dựa trên độ  hấp thụ  quang thu được của mẫu thí nghiệm đối  chiếu với đường chuẩn proanthocyanidin. [20] Tác giả Oi­Wah Lau, Shiu­Fai Luk and Hsiao­Lan Huang đã tiến hành  xác định tanin mẫu chè vào năm 1989. Mẫu được chiết trong nước  ở nhiệt   độ 80oC, mẫu được lọc. Tanin trong mẫu, khử ion sắt (III) thành ion sắt (II)   ở  nhiệt độ  80oC trong 20 phút. Sau đó ion sắt (II) phản  ứng với thuốc thử  1,10 ­ phenanthrolin  ở  pH 4,4 tạo thành một phức màu. Đo độ  hấp thụ  quang của dung dịch tại bước sóng 540 nm và xây dựng đường chuẩn trong   SV: Phạm Thị Hoa                  20 MSV:  1141120183
nguon tai.lieu . vn
Thạc sĩ - Tiến sĩ - Cao học Công nghệ thông tin Kinh tế - Thương mại Tài chính - Ngân hàng Kiến trúc - Xây dựng Điện-Điện tử-Viễn thông Cơ khí - Chế tạo máy Công nghệ - Môi trường Báo cáo khoa học Quản trị kinh doanh Khoa học xã hội Khoa học tự nhiên Nông - Lâm - Ngư Y khoa - Dược