Xem mẫu
- TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP TP.HCM
TR
KHOA CÔNG NGHỆ HOÁ HỌC
TIÊU LUÂN MÔN PHÂN TÍCH THỰC PHẨM
̉ ̣
Đề tài: XAC ĐINH OCHRATOXIN A TRONG NGŨ
́ ̣
CÔC BẰNG PHƯƠNG PHAP SĂC KÝ LONG
́ ́ ́ ̉
̣
HIÊU NĂNG CAO
GVHD: Ths Nguyên Đức Vượng
̃
GVHD:
SVTH : Võ Thanh Danh
Huynh Thị Thu Hà
̀
Huynh
Nguyên Ngoc Tường Vy
̃ ̣
Nguyên
Thanh Phố Hồ Chí Minh thang 5 - 2011
̀ ́
- NÔI DUNG BAO CAO
̣ ́ ́
NÔI
TỔNG QUAN VỀ OCHRATOXIN.
́ ̣
XAC ĐINH OCHRATOXIN A.
- TỔNG QUAN VỀ OCHRATOXIN
• Ochratoxin là độc tố vi nấm, được tạo ra từ
một số loài nấm thuộc giống Aspergillus
ochraceus và Penicillium viridicatum. Độc
tố nấm mốc thuộc nhóm này gọi là
Ochratoxin
• Trong số các loại ochratoxin, ochratoxin A
(OTA) có tính độc cao nhất. Ochratoxin A
có mặt trong khắp các loại nông sản thực
phẩm: ngũ cốc, thảo dược, bia, cà phê...
- TỔNG QUAN VỀ OCHRATOXIN A
• Ochratoxin A gây độc đến gan, thận và có khả
năng gây ung thư cho con người. Ochratoxin A
đã thể hiện được yếu tố gây đột biến.
Nấm thuộc giống Aspergillus ochraceus
- TỔNG QUAN VỀ OCHRATOXIN A
Tính chất hóa lý của Ochratoxin A
- Trọng lượng phân tử: 403.8
- Điểm nóng chảy: 169oC
- Phổ hấp thụ UV: 2 đỉnh; 216 – 333 nm
- Công thức phân tử: C20H18ClNO6
- Là tinh thể không màu, bền với nhiệt, tan trong dung môi
hữu cơ phân cực như: chloroform, methanol, ethanol ít tan
trong nước và tan trong pha đệm carbonat loãng. Dễ bị phân
hủy bởi ánh sáng, trong môi trường kiềm hoạt chất tẩy rửa.
- TỔNG QUAN VỀ OCHRATOXIN A
Công thức phân tử Ochratoxin A
- XAC ̣
́
XAC ĐINH OCHRATOXIN A
PHƯƠNG PHAP SĂC KÝ LONG HIÊU
́ ́ ̉ ̣
1
̀ ̣ ̀
NĂNG CAO (HPLC) LAM SACH BĂNG
SILICAGEL TCVN 7595-1:2007
PHƯƠNG PHAP SĂC KÝ LONG HIÊU
́ ́ ̉ ̣
2
̀ ̣ ̀
NĂNG CAO (HPLC) LAM SACH BĂNG
BICABONAT TCVN 7595-2:2007
- PHƯƠNG PHAP HPLC LAM SACH
́ ̀ ̣
PH
̀
BĂNG SILICAGEL
̣ ́ ̣
Pham vi ap dung.
́
Nguyên tăc.
Điều kiện xác định phân tich.
́
̀ ́
Quy trinh phân tich.
́ ́
Tinh toan.
- ̣ ́ ̣
Pham vi ap dung
Pham
• Tiêu chuân nay qui đinh phương phap xac đinh
̉ ̀ ̣ ́ ́ ̣
Tiêu
ochratoxin A với cac ham lượng lớn hơn 0.4µg/kg trong
́ ̀ µg/kg
cac mâu ngũ côc, quả khô, cac hat có dâu, đâu đô, cà phê
cac ̃
́ ́ ́ ̣ ̀ ̣ ̃
̣
nguyên liêu…
• Phương pháp này thử nghiệm trên bột mì có chứa hàm
Ph
lượng ochratoxin A từ 0.4µg/kg đến 1.2µg/kg
- Nguyên ́
Nguyên tăc
Sau khi đã axit hoa băng axit HCl và bổ sung
́ ̀
MgCl2 dung toluene để chiêt ochratoxin A (OTA).
̀ ́
dung
̀ ̣ ̣ ́ ̣ ́ ̣
Lam sach dich chiêt trên côt silicagel và xac đinh
̀ ́ ̉ ̣ ̣
OTA băng săc ký long hiêu năng cao trên côt pha
đao, nhân dang và sửa đôi bằng detectơ huynh
̉ ̣ ̣ ̉ ̀
quang.
- Điều kiện vận hành HPLC
Đi
• Pha động: acetonitril (HPLC) : Nước : acid acetic
băng = 49:49:2 (thay đổi tỉ lệ nếu cần).
• Tốc độ dòng: 1ml/phút
• Cột pha tích pha đảo: 250mm x 4.6mm x C18 (5µm).
• Detector : huỳnh quang 420nm
• V bơm: 20µl
- Điều kiện đường chuẩn
Đi
• Dung dịch chuẩn gốc A: cân 20mg vào BĐM 200ml
thêm 25 ml dd hỗn hợp (toluen : acid acetic acetic
băng = 99 :1 (V+V)), hòa tan mẫu, sau đó thêm hỗn
hợp trên tới vạch, pha loãng thích hợp để thu được
dung dịch 20µg/ml đến 30 µg/ml (dd1)
• Dung dịch làm việc: pha loãng dd1 với dung môi
trên để được nồng độ 4µg/ml. Sau đó lấy
5,10,25,50,100µl cho vào lọ nhỏ, cô khô dưới dòng
nitơ sau đó thêm pha động để có nồng độ achratoxin
cuối cùng 0.5;1;2.5;5;10 ng/25µl.
- Quy ̀ ́
Quy trinh phân tich
ống ly tâm 50ml dd
̃
20g Mâu
Ly tâm
250ml (V2)
(m0)
+ 30 ml HCl 2 mol/L
+ 50 MgCl2 0.4 mol/L
̣ ́
Côt chiêt
́ ̀
Khuây đêu ́
pha răn
+ 100 ml toluen (V1)
́
Hut 1 ml
(V3)
HPLC
Kết quả Bộ loc mang
̣ ̀
V bơm = 20µl (V4)
- Tinh ́
́
Tinh toan
́ ̀
WOTA : tinh băng µg/ Kg
: khôi lương mâu thử, tinh băng gam
́ ̃ ́ ̀
m0
mt : khôi lương OTA tương ứng với diện tích pic đọc
́
được từ đường chuẩn, tinh băng nanogam
́ ̀
: hệ số pha loãng
F
- PHƯƠNG PHAP HPLC LAM SACH
́ ̀ ̣
PH
̀
BĂNG BICACBONAT
̣ ́ ̣
Pham vi ap dung.
́
Nguyên Tăc.
̀ ́
Quy trinh phân tich.
́ ́
Tinh toan.
- ̣ ́ ̣
Pham vi ap dung
Pham
Tiêu chuân nay qui đinh phương phap xac đinh
̉ ̀ ̣ ́ ́ ̣
Tiêu
•
ochratoxin A với cac ham lượng lớn hơn 3µg/kg
́ ̀ µg/kg
trong cac mâu ngũ côc như ngô hat, cam, lua mi…
trong ́ ̃ ́ ̣ ́ ́ ̀
• Phương pháp này thử nghiệm trên mẫu ngũ cốc
Ph
chứa hàm lượng ochratoxin A từ 3.0µg/kg đến
16.3µg/kg
- Nguyên ́
Nguyên tăc
Ochratoxin A (OTA) được chiêt ra khoi ngũ côc
́ ̉ ́
̀ ̃
băng axit phosphoric pha loang trong clorofoc và
được tach phân đoan băng dung dich bicacbonat
́ ̣ ̀ ̣
loang. Rửa giai băng axit etyl axetat-metanol-axetat.
̃ ̉̀
OTA được tach băng HPLC pha đao, rôi nhân biêt
́ ̀ ̉ ̀ ̣ ́
và đinh lượng băng detectơ huynh quang.
̣ ̀ ̀
- Điều kiện vận hành HPLC
Đi
• Pha động: axetonitril : Nước : acid acetic tỉ lệ
49:49:2 (thay đổi tỉ lệ nếu cần).
• Tốc độ dòng: 1ml/phút
• Cột pha tích pha đảo: 250mm x 4.6mm x C18 (5µm).
• Detector : huỳnh quang 420nm
• V bơm: 20µl
- Điều kiện đường chuẩn
Đi
• Dung dịch chuẩn gốc A: cân 20mg vào BĐM 200ml
thêm 25 ml dd hỗn hợp (toluen : acid acetic acetic
băng = 99 :1 (V+V)), hòa tan mẫu, sau đó thêm hỗn
hợp trên tới vạch, pha loãng thích hợp để thu được
dung dịch 20µg/ml đến 30 µg/ml (dd1)
• Dung dịch làm việc: pha loãng dd1 với dung môi
trên để được nồng độ 4µg/ml. Sau đó lấy
5,10,25,50,100µl cho vào lọ nhỏ, cô khô dưới dòng
nitơ sau đó thêm pha động để có nồng độ ochratoxin
cuối cùng 0.5; 1; 2.5; 5; 10 ng/25µl.
- Quy ̀ ́
Quy trinh phân tich
Máy trộn tốc
̃
50g Mâu Bộ loc sợi thuy tinh
̣ ̉
độ cao
(m0) đã phủ 10g diatomit
Nghiên
̀ + 250 ml clorofom
̣ ̣
50 ml dich loc
+ 25 ml H3PO4 0.1mol/l
+ 10 ml
Mẫu thô NaHCO3 30g/l
Trộn 3 phut
́
+10 g diatomit
̃ ́
Phêu chiêt
Kết ̣ ́
Côt chiêt 5 ml
HPLC
quả
nguon tai.lieu . vn