- Trang Chủ
- Khoa học tự nhiên
- ĐỀ TÀI: CẢI TIẾN SẢN LƯỢNG CEPHALOSPORIN C BẰNG ADN TÁI TỔ HỢP ĐƯỢC HỢP NHẤT TRONG ACREMONIUM CHRYSOGENUM
Xem mẫu
- CHUYÊN ĐỀ:
«CẢI TIẾN SẢN LƯỢNG CEPHALOSPORIN C
BẰNG ADN TÁI TỔ HỢP ĐƯỢC HỢP NHẤT
TRONG ACREMONIUM CHRYSOGENUM»
Giáo viên hướng dẫn: Nguyễn Thị Minh Hằng
Nhóm sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Kim Liên
Nguyễn Thị Huyền
Cấn Đỗ Tuần
Hoàng Tiến Quyên
Trần Đức Tài
- «CẢI TIẾN SẢN LƯỢNG CEPHALOSPORIN C BẰNG ADN TÁI TỔ HỢP
ĐƯỢC HỢP NHẤT TRONG ACREMONIUM CHRYSOGENUM»
Đặt vấn đề
1.
Tổng quan
2.
Nội dung và phương pháp
3.
Kết luận
4.
- I. ĐẶT VẤN ĐỀ
sinh là một nhóm thuốc được sử
Kháng
dụng phổ biến trong y học điều trị các
bệnh viêm nhiễm do vi sinh vật gây ra.
Cephalosporin C (CPC) thuộc nhóm β-
lactam, là kháng sinh bán tổng hợp được sử
dụng rộng rãi hiện nay.
CPC được sản xuất bằng quy trình lên men
truyền thống trên quy mô công nghiệp nhờ
chủng nấm mốc Acremonium chrysogenum
tự nhiên tuy vậy năng suất chưa cao.
- dụng các kĩ thuật di truyền đã cải thiện
Áp
quy trình tìm kiếm các chủng cho sản
lượng cao.
Từ đó cho phép tạo ra chủng nấm
Acremonium chrysogenum mang ADN tái tổ
hợp cho sản lượng kháng sinh cao trong
quy trình sản xuất.
Các gen được hợp nhất trong chủng
Acremonium chrysogenum là các gen quan
trọng trong con đường sinh tổng hợp CPC:
cefEF, cefG ,vgb
- II. TỔNG QUAN
Sơ lược về sự phát hiện kháng sinh
1.
Nấm mốc Acremonium
2.
chrysogenum
Con đường sinh tổng hợp CPC
3.
- SƠ LƯỢC VỀ SỰ PHÁT HIỆN KHÁNG
SINH
Hiện tượng kìm hãm khả năng gây
bệnh của vi khuẩn Bacillus anthracis
(Pasteur và Joubert, 1877)
1 chế phẩm tách từ nấm mốc dùng để
điều trị các bệnh truyền nhiễm trên da
do cầu khuẩn gây ra (Gratia và đồng
nghiệp, 1925)
- SƠ LƯỢC VỀ SỰ PHÁT HIỆN KHÁNG
SINH
Fleming mô tả chi tiết chất kháng
1929,
sinh trong báo cáo về Penicillin.
Trong chiến tranh thế giới thứ II, kháng
sinh được dùng để điều trị bệnh cho
những người bị thương với số lượng
lớn.
Các nhà khoa học nhận thấy rằng
không chỉ các vi sinh vật mà cả thực
vật, động vật cũng có khả năng sinh
kháng sinh.
- SƠ LƯỢC VỀ SỰ PHÁT HIỆN KHÁNG
SINH
Từ thực tế đó, Glasby(1976) đã đưa ra định
nghĩa về chất kháng sinh: “ Một chất
kháng sinh là một hợp chất được tổng hợp
ta từ cơ thể sống và ức chế quá trình sống
của vi sinh vật ngay ở nồng độ thấp”.
Trong số đó thì kháng sinh nhóm β-lactam
được sử dụng nhiều và phổ biến nhất.
Các Cephalosporin C là kháng sinh bán tổng
hợp thuộc nhóm β-lactam hiện đang được
sử dụng rộng rãi vì phổ kháng khuẩn rộng
và ít độc với con người.
- SƠ LƯỢC VỀ KHÁNG SINH
C gồm các thế hệ 1,2,3,4.
Cephalosporin
Trong đó sử dụng nhiều là CPC thế hệ
1,2,3 còn thế hệ 4 được sử dụng hạn chế.
Chủng vi nấm được sử dụng để sản xuất
CPC trong công nghiệp là Acremonium
chrysogenum (Cephalosporium
acremonium).
- NẤM MỐC ACREMONIUM
CHRYSOGENUM.
Acremonium chrysogenum được dùng chủ yếu để
sản xuất CPC trên quy mô công nghiệp.
là một chi thuộc nấm bất
Cephalosporium
toàn (Deuteromycetes).
Căn cứ vào đặc điểm của sinh sản hữu tính,
thấy đó là các nấm thuộc chi Emericellopis
trong chi nấm túi (Ascomycetes).Chi này còn
có tên khác là Peyronellula hoặc
Saturnomycetes.
- NẤM MỐC ACREMONIUM
CHRYSOGENUM
Đặc điểm chủ yếu của Acremonium
chrysogenum:
Khuẩn lạc có hình dạng khác nhau trên môi
trường tổng hợp hoặc môi trường thạch –
glucose – khoai tây.
Màu sắc của khuẩn lạc Cephalosporium sp.
có thể là màu đỏ nhạt, đỏ thẫm trắng, màu tro
hoặc màu vàng.
- NẤM MỐC ACREMONIUM
CHRYSOGENUM
Khuẩn lạc khá chặt, sinh trưởng nhanh
trên môi trường thạch – glucose – khoai
tây, ban đầu màu trắng sau chuyển dần
sang đỏ nhạt.
Khuẩn ty khí sinh dạng nhung hay dạng
lông nhung thường bện lại thành từng bó,
có nếp nhăn dạng phóng xạ hoặc không.
Mặt sau của khuẩn lạc có màu vàng
nhạt.
- NẤM MỐC ACREMONIUM
CHRYSOGENUM
bào tử trần tụ lại thành khối chất
Các
nhày, khi gặp nước thì tan ra. Cuống bào
tử trần ngắn, thẳng, không phân nhánh,
không có vách ngăn, dạng gần tròn, hình
trứng hoặc oval.
- MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY ĐƯỢC SỬ DỤNG:
phần của môi trường YPS (%):
Thành
Cao nấm men: 4
Tinh bột: 15
KH2PO4: 1
MgSO4.7H2O: 0,5
Thạch: 15
pH = 7
(Theo USP 3,929,577 – 1975)
- Thành phần môi trường thạch – glucose –
khoai tây (g/l):
Khoai tây: 300
Glucose: 20
Thạch: 15
pH = 6 – 7
(Theo môi trường số 30,JCM)
- CON ĐƯỜNG SINH TỔNG HỢP CPC
- III. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP
Tạo chủng Acremonium chrysogenum
1.
mang ADN tái tổ hợp.
. Quy trình sản xuất CPC
2.
. Tối ưu hóa điều kiện lên men chủng
3.
A.chrysogenum mang gen tái tổ hợp
- TẠO CHỦNG ACREMONIUM
CHRYSOGENUM MANG ADN TÁI TỔ HỢP
Bước 1: Tách ADN tổng số từ khuẩn ty
của nấm Acremonium chrysogenum bằng
phương pháp tách chiết ADN
Bước 2: Nhân dòng cefEF, cefG bằng kĩ
thuật PCR
Bước 3: Tạo chủng Acremonium
chrysogenum tái tổ hợp
Bước 4: Kiểm tra các chủng biến nạp
bằng kĩ thuật lai Southern
- QUY TRÌNH SẢN XUẤT CPC
Phân lậ tuyể chọn
p, n
↓
Bả quả và hoạ hóa giống
o n t
↓
Lên men sả xuấ
n t
↓
Tách chiế và tinh sạ
t ch
↓
Thu sả phẩ
n m
- 1. PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN CHỦNG GIỐNG
nhận mẫu từ đất, nước, bùn.
Thu
Sử dụng YPS và môi trường thạch – glucose
– khoai tây được bổ sung Cephalosporin C
(CPC) nhằm ức chế các chủng nấm và vi
khuẩn khác không có khả năng kháng lại
kháng sinh này.
Môi trường có mọc khuẩn lạc nấm mốc dạng
Cephalosporium được tách ra
Kiểm tra hoạt tính bằng phương pháp cục
thạch và nghiên cứu đặc điểm sinh học của
các chủng có hoạt tính
nguon tai.lieu . vn