Xem mẫu

  1. Ch­¬ng VII. Nh©n gièng b»ng ph­¬ng ph¸p nu«i cÊy m« vµ tÕ bµo
  2. Ch­¬ng VII. Nh©n gièng b»ng ph­¬ng ph¸p nu«i cÊy m« vµ tÕ bµo 1. Kh¸i niÖm. Nh©n gièng b»ng ph­¬ng ph¸p nu«i cÊy m« vµ tÕ bµo thùc vËt lµ ph­¬ng ph¸p s¶n xuÊt hµng lo¹t c©y con tõ c¸c bé phËn cña c©y mÑ b»ng c¸ch nu«i cÊy chóng trong èng nghiÖm ë ®iÒu kiÖn v« trïng, cã m«i tr­êng thÝch hîp vµ ®­îc kiÓm so¸t. - Bé phËn nu«i cÊy cã thÓ lµ c¬ quan, m« hay tÕ bµo. Song nãi chung chóng cã kÝch th­íc rÊt nhá, h¬n n÷a l¹i ®­îc nu«i cÊy trong kh«ng gian còng rÊt nhá (èng nghiÖm, b×nh thÝ nghiÖm) nªn ph­¬ng ph¸p nh©n gièng nµy cßn ®­îc gäi lµ vi nh©n gièng - Ph­¬ng ph¸p nh©n gièng nµy ®­îc thùc hiÖn ë ®iÒu kiÖn v« trïng, víi m«i tr­êng sèng nh©n t¹o vµ ®­îc kiÓm so¸t nªn cßn ®­îc gäi lµ nh©n gièng in vitro (nh©n t¹o).
  3. Ch­¬ng VII. Nh©n gièng b»ng ph­¬ng ph¸p nu«i cÊy m« vµ tÕ bµo 2. C¬ së sinh häc cña ph­¬ng ph¸p nu«i cÊy m« - tÕ bµo.
  4. Ch­¬ng VII. Nh©n gièng b»ng ph­¬ng ph¸p nu«i cÊy m« vµ tÕ bµo + TÝnh toµn n¨ng: theo s¬ ®å trªn th× bÊt cø mét tÕ bµo nµo cña c¬ thÓ (ë m« ph©n sinh hay m« ph©n ho¸) ®Òu cã nh©n gièng hÖt nh©n tÕ bµo hîp tö ban ®Çu, tøc lµ ®Òu m¹ng bé gen gièng hÖt bé gen cña hîp tö ban ®Çu (bé gen chøa trong bé NST). Bëi vËy khi ®­îc t¸ch ra khái c¬ thÓ vµ gÆp ®iÒu kiÖn sèng thÝch hîp th× bÊt cø tÕ bµo nµo ®Òu cã thÓ ph¸t triÓn thµnh mét c¬ thÓ hoµn chØnh. + HiÖn t­îng ph¶n ph©n ho¸ vµ t¸i ph©n ho¸: Theo s¬ ®å trªn, mçi tÕ bµo ë giai ®o¹n ≤ 8 tÕ bµo (tb ph«i sinh) khi ®­îc t¸ch rêi ra th× ®Òu cã thÓ ph¸t triÓn thµnh 1 c¬ thÓ hoµn chØnh gÇn ®Çy ®ñ c¸c c¬ quan. V× bÊt cø tÕ bµo nµo còng ®Òu cã nh©n vµ tÕ bµo chÊt nh­ hîp tö (hay cßn gäi lµ TB tr¾ng/TB ch­a ph©n ho¸). ThÕ cßn khi t¸ch tÕ bµo ra khái m« chuyªn ho¸ ®Ó nu«i cÊy th× tõ TB nµy sÏ h×nh thµnh nªn c¸c tÕ bµo míi (qua ph©n ho¸) vÉn theo h­íng ®· ®­îc ph©n ho¸. Tøc lµ trong tr­êng hîp nµy chØ cã hiÖn t­îng sinh tr­ëng (t¨ng sinh kh«i cña c¬ quan cò) chø kh«ng cã hiÖn t­îng ph¸t triÓn (h×nh thµnh c¬ quan míi) => tõ tÕ bµo nu«i cÊy sÏ kh«ng h×nh thµnh 1 c¬ thÓ hoµn chØnh.
  5. Ch­¬ng VII. Nh©n gièng b»ng ph­¬ng ph¸p nu«i cÊy m« vµ tÕ bµo 3. ý nghÜa cña nu«i c©y m« - tÕ bµo. - Lµ ph­¬ng ph¸p nh©n gièng sinh d­ìng nªn nã mang ®Çy ®ñ c¸c ­u ®iÓm cña nh©n gièng sinh d­ìng. - Nh©n gièng b»ng ph­¬ng ph¸p nu«i cÊy m« - tÕ bµo cã hÖ sè nh©n cao. - Nh©n gièng b»ng ph­¬ng ph¸p nu«i cÊy m« - tÕ bµo ®­îc tiÕn hµnh mét c¸ch chñ ®éng trong mäi ®iÒu kiÖn thêi tiÕt vµ mäi thêi ®iÓm trong n¨m. - Ngoµi ra kh¸c víi nh©n gièng b»ng hom th× c©y trång ®­îc t¹o ra b»ng ph­¬ng ph¸p nµy cã ®é trÎ cao h¬n rÊt nhiÒu (gÇn b»ng c©y h¹t), cã bé rÔ tèt h¬n nhiÒu so víi c©y hom - C©y trång ®­îc t¹o ra tõ ph­¬ng ph¸p nu«i cÊy m« - tÕ bµo cã h×nh thÓ gièng c©y h¹t => kh¾c phôc ®­îc hiÖn t­îng "b¶o l­u côc bé " th­êng b¾t gÆp ë c©y trång ®­îc t¹o ra b»ng gi©m hom.
  6. Ch­¬ng VII. Nh©n gièng b»ng ph­¬ng ph¸p nu«i cÊy m« vµ tÕ bµo 4. C¸c h×nh thøc nh©n gièng in vitro. 4.1. Nu«i cÊy m« ph©n sinh: - Nu«i cÊy ®Ønh sinh tr­ëng: + Nu«i cÊy ®Ønh th©n, ®Ønh cµnh: th­êng lµ cho c©y lµ kim. + Nu«i cÊy chåi n¸ch: th­êng dïng cho nh÷ng c©y l¸ réng (vd: Keo, B¹ch ®µn rÊt phæ biÕn). + Nu«i cÊychåi bÊt ®Þnh: Chåi bÊt ®Þnh lµ chåi ®­îc h×nh thµnh tõ bÊt cø bé phËn nµo cña c©y khi ®­îc kÝch thÝch (c¬ giíi hay ho¸ häc). - Tõ m« ph©n sinh ph¸t triÓn trùc tiÕp thµnh c©y.
  7. Ch­¬ng VII. Nh©n gièng b»ng ph­¬ng ph¸p nu«i cÊy m« vµ tÕ bµo 4.2. Nu«i cÊy m« chuyªn ho¸: nu«i cÊy bÊt cø bé phËn nµo cña c©y (m¶nh th©n, l¸, rÔ, ®o¹n cµnh, c¸nh hoa,...).
  8. Ch­¬ng VII. Nh©n gièng b»ng ph­¬ng ph¸p nu«i cÊy m« vµ tÕ bµo 5. qui tr×nh nh©n gièng b»ng ph­¬ng ph¸p nu«i cÊy m« - tÕ bµo.
  9. Ch­¬ng VII. Nh©n gièng b»ng ph­¬ng ph¸p nu«i cÊy m« vµ tÕ bµo 5.1. Giai ®o¹n chuÈn bÞ. - §­a c©y tèt (c©y ­u viÖt) vÒ v­ên s­u tËp, v­ên gièng + §Ó gi¶m bít nguån c¹nh (lai t¹p xung quanh) + §Ó cã ®iÒu kiÖn ch¨m sãc cho c©y sinh tr­ëng vµ ph¸t triÓn tèt + §Ó chñ ®éng lÊy mÉu nh©n gièng ViÖc ®­a c¸c c©y tèt vÒ v­ên s­u tËp cã thÓ b»ng ph­¬ng ph¸p ghÐp hoÆc gi©m hom. - TrÎ ho¸ c©y gièng gèc: §Ó t¹o mÉu cÊy cßn non (trÎ ho¸: dùa trªn qu¸ tr×nh tuæi quyÕt ®Þnh cña c¸c tÕ bµo)
  10. Ch­¬ng VII. Nh©n gièng b»ng ph­¬ng ph¸p nu«i cÊy m« vµ tÕ bµo 5.2. Giai ®o¹n cÊy khëi ®éng. (t¹o mÉu s¹ch trong èng nghiÖm) - Môc ®Ých: t¹o ®­îc mÉu c©y sèng trong èng nghiÖm s¹ch ho¸ häc còng nh­ sinh häc. T¹o ®­îc nguån mÉu s¹ch (s¹ch vÒ ho¸ häc vµ sinh häc) sèng ®­îc trong ®iÒu kiÖn in vitro. + S¹ch ho¸ häc: kh«ng lµm ¶nh h­ëng ®Õn m«i tr­êng ho¸ häc phï hîp víi loµi c©y. + S¹ch sinh häc: (s¹ch nÊm vµ vius) v× mÉu cÊy chØ lµ 1 bé phËn rÊt nhá cña c©y nªn sau khi t¸ch khái c©y mÑ cÊy vµo b×nh th× nã cÇn mét thêi gian ®Ó håi phôc sau ®ã míi sinh tr­ëng vµ ph¸t triÓn. Trong khi nÊm vµ vi khuÈn lµ nh÷ng sinh vËt ®¬n bµo hay ®a bµo, chóng vµo theo mÉu cÊy lµ vµo c¶ c¬ thÓ nªn chóng sinh tr­ëng vµ ph¸t triÓn ngay => sö dông hÕt m«i tr­êng nu«i cÊy => khi mÉu cÊy håi phôc th× m«i tr­êng ®· háng. - Ph­¬ng ph¸p: + Lµm s¹ch ho¸ häc b»ng röa: ®Çu tiªn tiÕn hµnh röa b»ng n­íc m¸y, tiÕp theo lµ röa b»ng xµ phßng vµ cuèi cïng lµ röa b»ng n­íc cÊt. + Lµm s¹ch sinh häc b»ng khö trïng: khö trïng b»ng dung dÞch canxi hypoclorit 1% hoÆc b»ng HgCl2 0,1% trong 5 phót, tuú mÉu giµ hay non. + Sau khi röa vµ khö trïng th× tiÕn hµnh cÊy mÉu s¹ch vµo b×nh chøa trong m«i tr­êng ho¸ häc còng ®· ®­îc khö trïng (b»ng nåi hÊp). ViÖc cÊy mÉu ®­îc tiÕn hµnh trong tñ cÊy m« trïng.
nguon tai.lieu . vn