Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ: Nghiên cứu tạo nguyên liệu chứa Bacillus clausii dạng bào tử

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHÙNG THỊ NGỌC HUYỀN NGHIÊN CỨU TẠO NGUYÊN LIỆU CHỨA Bacillus clausii DẠNG BÀO TỬ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2015 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHÙNG THỊ NGỌC HUYỀN NGHIÊN CỨU TẠO NGUYÊN LIỆU CHỨA Bacillus clausii DẠNG BÀO TỬ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS. Đàm Thanh Xuân DS. Nguyễn Thị Thu Phương Nơi thực hiện: Bộ môn Công Nghiệp Dược Trường Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI - 2015 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành được khóa luận này, ngoài sự nỗ lực của bản thân, em đã nhận được rất nhiều sự giúp đỡ của gia đình, thầy cô, bạn bè. Em xin gửi lời cảm ơn chân thành và sâu sắc đến TS. Đàm Thanh Xuân và DS. Nguyễn Thị Thu Phương là những người thầy đã tận tình chỉ bảo, hướng dẫn và tạo mọi điều kiện thuận lợi từ những ngày đầu đến khi em hoàn thành khóa luận tốt nghiệp. Em xin chân thành cảm ơn đến các thầy cô và các anh chị kĩ thuật viên của bộ môn Công Nghiệp Dược – Trường Đại học Dược Hà Nội đã quan tâm và giúp đỡ em trong suốt thời gian làm thực nghiệm. Em xin trân trọng cảm ơn các thầy cô cùng cán bộ Trường Đại học Dược Hà Nội đã dạy dỗ, quan tâm em trong suốt 5 năm học tập tại trường. Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, người thân, bạn bè đã luôn động viên khích lệ em trong suốt quá trình học tập và làm khóa luận. Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng 5 năm 2015 Sinh viên Phùng Thị Ngọc Huyền MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ............................................................................................................1 CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN.....................................................................................2 1.1. ĐẠI CƯƠNG VỀ PROBIOTIC ....................................................................2 1.1.1. Định nghĩa..................................................................................................2 1.1.2. Vai trò.........................................................................................................3 1.1.3. Probiotic từ bào tử......................................................................................4 1.2. KHÁI QUÁT VỀ Bacillus clausii..................................................................5 1.2.1. Đặc điểm hình thái .....................................................................................6 1.2.2. Cấu trúc bộ gen...........................................................................................6 1.2.3. Đặc điểm sinh hóa......................................................................................7 1.2.4. Đặc điểm sinh thái......................................................................................7 1.2.5. Điều kiện nuôi cấy......................................................................................7 1.2.6. Ứng dụng của B. clausii.............................................................................7 1.2.7. Một số nghiên cứu lên quan tới B. clausii..................................................8 1.3. BÀO TỬ VI KHUẨN ..................................................................................8 1.3.1. Quá trình hình thành bào tử......................................................................11 1.3.2. Tính chất của bào tử vi khuẩn và ứng dụng.............................................11 CHƯƠNG 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU...................13 2.1. Nguyên vật liệu và thiết bị............................................................................13 2.1.1. Nguyên vật liệu ........................................................................................13 2.1.2. Môi trường sử dụng trong nghiên cứu......................................................14 2.1.3. Thiết bị .....................................................................................................14 2.2. Nội dung nghiên cứu.....................................................................................15 2.2.1. Lựa chọn điều kiện nuôi cấy để thu lượng bào tử lớn nhất......................15 2.2.2. Lựa chọn phương pháp xử lý, bảo quản và theo dõi độ ổn định của mẫu nguyên liệu trong quá trình bảo quản.................................................................15 2.3. Phương pháp nghiên cứu.............................................................................15 2.3.1. Hoạt hóa giống từ chế phẩm Enterogermina............................................15 2.3.2. Phương pháp nhân giống trong môi trường lỏng.....................................15 2.3.3. Phương pháp đo quang đánh giá sự sinh trưởng của vi sinh vật..............15 2.3.4. Phương pháp thu sinh khối.......................................................................16 2.3.5. Phương pháp xử lý sinh khối bằng lysozym thu bào tử ..........................16 2.3.6. Phương pháp đông khô ............................................................................17 2.3.7. Phương pháp nhuộm màu bào tử: theo Ogietska ....................................17 2.3.8. Xác định số lượng VSV sống sót theo phương pháp pha loãng liên tục……………………………………………………………………………...18 2.3.9. Định lượng đường dư theo phương pháp Schoorl – Regenbogen............19 CHƯƠNG 3. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN ............................21 3.1. Lựa chọn điều kiện nuôi cấy để thu được lượng bào tử lớn nhất............21 3.1.1. Xác định thời điểm lượng sinh khối và bào tử hình thành nhiều nhất.....21 3.1.2. Khảo sát sự phát triển của vi khuẩn khi bổ sung glucose vào môi trường nuôi cấy ..............................................................................................................23 3.2. Lựa chọn phương pháp xử lý, bảo quản và theo dõi độ ổn định của mẫu nguyên liệu trong quá trình bảo quản...............................................................26 3.2.1. Xác định phương pháp xử lý mẫu nuôi cấy .............................................26 3.2.2. Lựa chọn phương pháp bảo quản B. clausii............................................30 3.2.3. Theo dõi độ ổn định của mẫu nguyên liệu bảo quản trong NaCl 0,9% ...33 3.2.4. Xác định lượng bào tử từ sinh khối thu được, tính toán số lượng ống sản phẩm tạo thành ...................................................................................................35 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ................................................................................38 ... - tailieumienphi.vn