- Trang Chủ
- Y khoa - Dược
- Đề tài: Nghiên cứu định lượng đồng thời Adenosin và allopurinol trong dung dịch wisconsin - A bằng phương pháp quang phổ cộng tính - HV Quân Y
Xem mẫu
- bé quèc phßng
Häc viÖn qu©n y
*****
B¸o c¸o khãa luËn TN DS §¹i häc
Nghiªn cøu ®Þnh lîng ®ång thêi
adenosin vµ allopurinol trong
dung dÞch wisconsin - a b»ng ph¬ng
ph¸p quang phæ céng tÝnh
Ngêi híng dÉn: TS. Phan V¨n B×nh
Thùc hiÖn: SV. NguyÔn Hång S¬n Dîc 7
- ®Æt vÊn ®Ò
- Trong y häc hiÖn ®¹i ghÐp t¹ng lµ ph¬ng ph¸p ch÷a bÖnh h÷u
hiÖu.
- Dung dÞch Wisconsin V lµ dung dÞch ®Ó röa vµ b¶o qu¶n t¹ng
ghÐp d¹ng Wisconsin.
- Dung dÞch Wisconsin V ®îc ®ãng gãi thµnh 2 ®¬n vÞ thµnh
phÈm riªng biÖt.
-Trong dung dÞch Wisconsin A adenosin vµ allopurinol lµ c¸c
hîp chÊt h÷u c¬ cã hµm lîng nhá nhng cã vai trß quan träng.
- ®Æt vÊn ®Ò
Chóng t«i chän ®Ò tµi:
Nghiªn cøu ®Þnh lîng ®ång thêi adenosin vµ
allopurinol trong dung dÞch Wisconsin - A b»ng ph¬ng
ph¸p quang phæ céng tÝnh ” víi môc tiªu sau :
1. X©y dùng ph¬ng ph¸p ®Þnh lîng ®ång thêi adenosin vµ
allopurinol trong dung dÞch Wisconsin - A b»ng ph¬ng ph¸p
quang phæ céng tÝnh.
2. Kh¶o s¸t ®é lÆp l¹i vµ ®é ®óng cña ph¬ng ph¸p.
- I. Tæng quan
1.1.Thµnh phÇn & nång ®é c¸c chÊt trong dd Wisconsin - A.
MgSO4 .7 H2O 0,63 g
Adenosin 0,683 g
Allopurinol 0,069 g
Acid lactobionic 18,28 g
Raffinose. 9,20 g
Hydroxy ethyl starch: 25,50 g
Kali hydroxyd võa ®ñ ®Õn pH = 7,0
Níc cÊt pha tiªm võa ®ñ 500ml
- 1.2. T¸c dông cña adenosin vµ allopurinol.
Trong tÕ bµo c¬ tim, adenosin thÓ hiÖn ho¹t tÝnh sinh lý vµ dîc
lý, tham gia vµo qu¸ tr×nh t¸i t¹o ATP. V× vËy adenosin ®îc sö dông
lµm thuèc chèng lo¹n nhÞp vµ b¶o vÖ m¹ch vµnh trong bÖnh nhåi
m¸u c¬ tim.
Trong dung dÞch Wisconsin, adenosin cã t¸c dông phßng
ngõa lo¹n nhÞp sau ghÐp, vµ lµ nguån dù tr÷ ®Ó t¸i t¹o n¨ng lîng.
Allopurinol cã ho¹t tÝnh øc chÕ enzym xanthin oxydase, cã t¸c
dông lµm gi¶m nång ®é acid uric trong dÞch néi tÕ bµo. Do vËy trong y
häc allopurinol ®îc sö dông lµm thuèc ch÷a bÖnh gót
Trong dung dÞch Wisconsin, allopurinol lµ chÊt chèng oxy ho¸,
chèng acid uric, chèng ®éc, chèng peroxyd.
- 1.3.§Þnh lîng hçn hîp adenosin vµ allopurinol
NguyÔn ChÝ Kiªn nghiªn cøu ®Þnh lîng ®ång thêi adenosin &
allopurinol trong dung dÞch Wisconsin – A b»ng ph¬ng ph¸p s¾c ký
láng hiÖu n¨ng cao.
1.4.Ph¬ng ph¸p quang phæ céng tÝnh
Do ®é hÊp thô cã tÝnh céng tÝnh nªn nÕu cã mét d dÞch hçn hîp gåm n
chÊt th× ®é hÊp thô cña hçn hîp b»ng tæng ®é hÊp thô cña n dung dÞch tõng
chÊt riªng rÏ cã cïng nång ®é nh trong hçn hîp. Trêng hîp ®¬n gi¶n
nhÊt lµ hçn hîp gåm hai chÊt, ta cã : Ahh = A1 + A2
Chän hai bíc sãng 1, 2 vµ ®o ®é hÊp thô cña hçn hîp ë 2 bíc sãng ®ã
T¹i 1: Ahh 1 = E1 1C1 + E2 1C2 ; T¹i 2: Ahh 2 = E1 2C1 + E2 2C2
Gi¶i hÖ ph¬ng tr×nh trªn ta t×m ®îc:
A1E22-A2E21 A2E11-A1E12
C1= x 100; C 2= x 100;
= E11E22 – E12E 21
- II. VËt liÖu & ph¬ng ph¸p nC
2.1. VËt liÖu nghiªn cøu.
2.1.1. Nguyªn liÖu, ho¸ chÊt, dung m«i :
- Adenosin ( C10H13N5O4 , ptl. = 267,2 ®¹t USP 24.
- Allopurinol (C5H4N4O, ptl. = 136,1 ) ®¹t USP 24.
2.1.2. Dông cô, thiÕt bÞ :
Quang phæ kÕ UV - VIS Cintra - 40 GBC corporation óc.
2.1.3. C¬ së thùc nghiÖm:
2.2. ®èi tîng nghiªn cøu:
Ho¸ chÊt adenosin, allopurinol vµ dung dÞch Wisconsin - A
- 2.3. Ph¬ng ph¸p nghiªn cøu.
2.3.1.Kh¶o s¸t ¶nh hëng cña pH dung dÞch ®Õn phæ hÊp thô ¸nh s¸ng
cña adenosin vµ allopurinol.
Ghi phæ hÊp thô tõ bíc sãng 200 – 400nm c¸c dung dÞch adenosin vµ
allopurinol cã pH tõ 6,0 ®Õn 8,0. So s¸nh phæ hÊp thô cña c¸c dung
dÞch ®ã.
Lùa chän pH thÝch hîp.
2.3.2. Kh¶o s¸t ¶nh hëng cña c¸c thµnh phÇn kh¸c trong dd
Wisconsin - A ®èi víi ®é hÊp thô cña Adenosin vµ Allopurinol.
Ghi phæ hÊp thô tõ bíc sãng 200 – 400nm c¸c dung dÞch Magnesi
sulfat, Acid lactobionic, Raffinose, Hydroxyethyl starch, dung dÞch
chuÈn hçn hîp adenosin vµ allopurinol, dung dÞch chuÈn hçn hîp cã
thªm c¸c thµnh phÇn kh¸c.
Xem xÐt phæ hÊp thô cña c¸c dung dÞch thµnh phÇn kh¸c trong dung
dÞch Wisconsin – A. So s¸nh phæ hÊp thô cña hai hçn hîp.
- 2.3.3. Kh¶o s¸t, chän cÆp bíc sãng thÝch hîp ®Ó ®Þnh lîng ®ång
thêi adenosin vµ allopurinol trong d dÞch Wisconsin - A.
Trªn c¬ së phæ UV cña adenosin vµ allopurinol trong dung dÞch
®Öm phosphat pH = 7,0 chän 4 bíc sãng t¬ng øng víi cùc ®¹i hÊp
thô cña adenosin vµ allopurinol lµ 205, 207, 250, 260nm.
®o ®é hÊp thô cña tÊt c¶ c¸c mÉu t¹i c¸c bíc sãng 205, 207, 250,
260nm. LÊy gi¸ trÞ ®é hÊp thô quang trung b×nh cña adenosin vµ
allopurinol ë tõng bíc sãng…
TÝnh nång ®é adenosin vµ allopurinol trong hçn hîp theo c«ng
thøc :
A1E22-A2E21 A2E11-A1E12
CAd= x 100; CAL= x 100;
= E11E22 – E12E 21
Chän cÆp bíc sãng thÝch hîp ®Ó ®Þnh lîng ®ång thêi adenosin vµ
allopurinol.
- 2.3.4. X©y dùng ph¬ng ph¸p ®Þnh lîng ®ång thêi adenosin
vµ allopurinol trong dung dÞch Wisconsin - A.
2.3.4.1. ®Ò xuÊt ph¬ng ph¸p.
Dùa vµo kÕt qu¶ nghiªn cøu ë c¸c môc 2.3.1, 2.3.2, 2.3.3 ®Ó
®Ò xuÊt ph¬ng ph¸p ®Þnh lîng ®ång thêi adenosin vµ
allopurinol trong dung dÞch Wisconsin - A.
2.3.4.2. Kh¶o s¸t ¶nh hëng cña ®é lÖch tû lÖ nång ®é
adenosin vµ allopurinol ®èi víi kÕt qu¶ ph©n tÝch.
Pha 2 dung dÞch hçn hîp adenosin vµ allopurinol chuÈn cã ®é
lÖch nång ®é lµ 11/0,9 & 9/1,1. ®Þnh lîng theo ph¬ng ph¸p ®·
®Ò xuÊt.
- 2.3.4.3. Kh¶o s¸t ®é lÆp l¹i cña ph¬ng ph¸p.
®é lÆp l¹i cña ph¬ng ph¸p ®îc x¸c ®Þnh b»ng ®é lÖch chuÈn t-
¬ng ®èi cña 5 mÉu ®o trªn cïng 1 chai WA ( l« 20/10/04 ) vµ so
s¸nh nång ®é trung b×nh t×m thÊy trªn mét chai kh¸c cïng l«,
®Þnh lîng vµo ngµy h«m sau.
2.3.4.4. Kh¶o s¸t ®é ®óng b»ng ph¬ng ph¸p thªm chuÈn.
®é ®óng cña ph¬ng ph¸p ®îc x¸c ®Þnh b»ng ph¬ng ph¸p thªm
mét lîng chÝnh x¸c adenosin vµ allopurinol chuÈn vµo hai mÉu
thö WA trong cïng l« 20/10/04 (®· ®îc x¸c ®Þnh hµm lîng
adenosin & allopurinol ë môc kh¶o s¸t ®é lÆp l¹i ).
®¸nh gi¸ ®é ®óng dùa vµo ®é sai sè t¬ng ®èi.
- 2.4. Ph¬ng ph¸p xö lý sè liÖu.
C¸c sè liÖu ®îc xö lý b»ng ph¬ng ph¸p to¸n thèng kª dïng
trong y sinh häc.
Th«ng qua c¸c ®Æc trng: Gi¸ trÞ trung b×nh, ®é lÖch chuÈn, ®é
lÖch chuÈn t¬ng ®èi, t tÝnh to¸n ...
- III. KÕt qu¶ nghiªn cøu & bµn luËn
3.1. KÕt qu¶ kh¶o s¸t ¶nh hëng cña pH ®Õn ®é hÊp thô quang
phæ cña dung dÞch adenosin vµ allopurinol
3.1.1.§èi víi adenosin.
207
0.6
Abs
260
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0 226
200.0 225.0 250.0 275.0 300.0 325.0 350.0 375.0 400.0
nm
H×nh 3.1. Phæ hÊp thô cña dung dÞch adenosin ë pH = 6,0.
- 207
0.6
Abs
260
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0 226
200.0 225.0 250.0 275.0 300.0 325.0 350.0 375.0 400.0
nm
H×nh 3.2. Phæ hÊp thô cña dung dÞch adenosin ë pH = 6,5.
- 207
0.6
Abs
260
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0 226
200.0 225.0 250.0 275.0 300.0 325.0 350.0 375.0 400.0
nm
H×nh 3.3. Phæ hÊp thô cña dung dÞch adenosin ë pH = 7,0.
- 207
0.6
Abs
260
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0 226
200.0 225.0 250.0 275.0 300.0 325.0 350.0 375.0 400.0
nm
H×nh 3.4. Phæ hÊp thô cña dung dÞch adenosin ë pH = 7,5.
- 207
0.6
Abs
260
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0 226
200.0 225.0 250.0 275.0 300.0 325.0 350.0 375.0 400.0
nm
H×nh 3.5. Phæ hÊp thô cña dung dÞch adenosin ë pH = 8,0.
- 3.1.2. §èi víi allopurinol
205
1.25
Abs
1.0
0.75 250
0.5
0.25
230
0.0
200.0 225.0 250.0 275.0 300.0 325.0 350.0 375.0 400.0
nm
H×nh 3.6. Phæ hÊp thô cña dung dÞch allopurinol ë pH = 6,0
- 205
1.25
Abs
1.0
0.75 250
0.5
0.25
230
0.0
200.0 225.0 250.0 275.0 300.0 325.0 350.0 375.0 400.0
nm
H×nh 3.7. Phæ hÊp thô cña dung dÞch allopurinol ë pH = 6,5
- 205
1.25
Abs
1.0
0.75
250
0.5
0.25
230
0.0
200.0 225.0 250.0 275.0 300.0 325.0 350.0 375.0 400.0
nm
H×nh 3.8. Phæ hÊp thô cña dung dÞch allopurinol ë pH = 7,0
nguon tai.lieu . vn