- Trang Chủ
- Y khoa - Dược
- Đề tài: Nghiên cứu biểu hiện gen mã hóa kháng nguyên GP 120 của virus HIV phân type B lưu hành tại Việt Nam
Xem mẫu
- KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP
- Đề tài: Nghiên cứu biểu hiện gen mã hóa
kháng nguyên GP 120 của virus HIV phân
type B lưu hành tại Việt Nam
Người hướng dẫn : PGS.TS Đinh Duy Kháng
Sinh viên : Phạm Thu Trang
- Tình hình HIV trên thế giới 2009
- •
Ước tính đến năm 2011, Việt Nam
có khoảng 311.500 người bị nhiễm
bệnh.
•
Tại Việt Nam tính đến ngày
31/12/2010
•
183.938 người
•
44.938 người
•
49.477 người
- Phân bố các phân type HIV-1 M theo vùng địa lý (2008)
- Glycoprotein gp 120
- Glycoprotein vỏ gp 120 của virus HIV
- Phức hợp gp120-CD4-đồng thụ thể
- VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
- Vật liệu
•
Plasmid mang gen gp120 của virus
HIV phân type B lưu hành ở Việt
Nam (mẫu số 6, Quảng Ninh) được
tách dòng thành công tại Phòng Vi
sinh vật học phân tử - Viện CNSH -
Viện KH&CN VN.
•
Các hóa chất, sinh phẩm và trang
thiết bị tại Phòng Vi sinh vật học
phân tử - Viện CNSH - Viện
KH&CN VN.
- Phương pháp nghiên cứu
• Nhân bản gen mã hóa protein gp120B của virus HIV bằng phương
pháp PCR.
• Gắn sản phẩm PCR vào vector.
• Biến nạp DNA plasmid vào tế bào E.coli.
• Cắt DNA bằng enzyme giới hạn.
• Xác định trình tự gen bằng máy giải trình tự gen tự động
• Biểu hiện gen trong tế bào E.coli tái tổ hợp.
•
Tinh sạch protein tái tổ hợp bằng cột ái lực Ni2+ .
- KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
- Thiết kế vector biểu hiện pET32a(+) mang gen gp120B
- Khuếch đại gen gp120B_EX bằng cặp mồi biểu hiện
- Tạo vector tái tổ hợp pET32a(+) mang gen gp120B_EX
•
ĐC1: Thang DNA chuẩn 1 kb.
•
ĐC 1: Plasmid gốc •
ĐC2-6: Các dòng plasmid 3, 4, 8, 10,
12 cắt bằng BamH I và Xho I
vector pET32a(+) •
ĐC7: Đối chứng (đoạn gen
• gp120B_EX)
- Tinh sạch DNA plasmid
ĐC1-3: Tương ứng với dòng plasmid tái tổ hợp số 4, 10, 12
- Gen gp120B_EX trong vector biểu hiện pET32a(+) đã được giải
trình tự
- Kiểm tra khung đọc của gen gp120B trong vector
pET32a(+)
- Biểu hiện gen gp120B trong vi khuẩn E.coli chủng BL21 StarTM
(DE3)
ĐC 1: Thang Protein chuẩn
ĐC 2,4: Mẫu không cảm ứng
ĐC 3,5: Mẫu cảm ứng bằng IPTG 1mM
nguon tai.lieu . vn