Xem mẫu

  1. KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP
  2. Đề tài: Nghiên cứu biểu hiện gen mã hóa kháng nguyên GP 120 của virus HIV phân type B lưu hành tại Việt Nam Người hướng dẫn : PGS.TS Đinh Duy Kháng Sinh viên : Phạm Thu Trang
  3. Tình hình HIV trên thế giới 2009
  4. • Ước tính đến năm 2011, Việt Nam có khoảng 311.500 người bị nhiễm bệnh. • Tại Việt Nam tính đến ngày 31/12/2010 • 183.938 người • 44.938 người • 49.477 người
  5. Phân bố các phân type HIV-1 M theo vùng địa lý (2008)
  6. Glycoprotein gp 120
  7. Glycoprotein vỏ gp 120 của virus HIV
  8. Phức hợp gp120-CD4-đồng thụ thể
  9. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
  10. Vật liệu • Plasmid mang gen gp120 của virus HIV phân type B lưu hành ở Việt Nam (mẫu số 6, Quảng Ninh) được tách dòng thành công tại Phòng Vi sinh vật học phân tử - Viện CNSH - Viện KH&CN VN. • Các hóa chất, sinh phẩm và trang thiết bị tại Phòng Vi sinh vật học phân tử - Viện CNSH - Viện KH&CN VN.
  11. Phương pháp nghiên cứu • Nhân bản gen mã hóa protein gp120B của virus HIV bằng phương pháp PCR. • Gắn sản phẩm PCR vào vector. • Biến nạp DNA plasmid vào tế bào E.coli. • Cắt DNA bằng enzyme giới hạn. • Xác định trình tự gen bằng máy giải trình tự gen tự động • Biểu hiện gen trong tế bào E.coli tái tổ hợp. • Tinh sạch protein tái tổ hợp bằng cột ái lực Ni2+ .
  12. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
  13. Thiết kế vector biểu hiện pET32a(+) mang gen gp120B
  14. Khuếch đại gen gp120B_EX bằng cặp mồi biểu hiện
  15. Tạo vector tái tổ hợp pET32a(+) mang gen gp120B_EX • ĐC1: Thang DNA chuẩn 1 kb. • ĐC 1: Plasmid gốc • ĐC2-6: Các dòng plasmid 3, 4, 8, 10, 12 cắt bằng BamH I và Xho I vector pET32a(+) • ĐC7: Đối chứng (đoạn gen • gp120B_EX)
  16. Tinh sạch DNA plasmid ĐC1-3: Tương ứng với dòng plasmid tái tổ hợp số 4, 10, 12
  17. Gen gp120B_EX trong vector biểu hiện pET32a(+) đã được giải trình tự
  18. Kiểm tra khung đọc của gen gp120B trong vector pET32a(+)
  19. Biểu hiện gen gp120B trong vi khuẩn E.coli chủng BL21 StarTM (DE3) ĐC 1: Thang Protein chuẩn ĐC 2,4: Mẫu không cảm ứng ĐC 3,5: Mẫu cảm ứng bằng IPTG 1mM
nguon tai.lieu . vn