Báo cáo thực tập tốt nghiệp: Một số kỹ thuật xét nghiệm chẩn đoán các bệnh

BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH…………………………………………………………………...3 CHỮ VIẾT TẮT………………………………………………………………………6 LỜI MỞ ÐẦU…………………………………………………………………………7 CHƢƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU……………………………………………..8 1.1.Giới thiệu về khoa xét nghiệm di truyền y học bệnh viện Từ Dũ………………….8 1.2.Tổng quan về các phương pháp…………………………………………………...11 1.2.1.Karyotype……………………………………………………………………….11 1.2.2.Sinh học phân tử………………………………………………………………...14 CHƢƠNG 2. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP…………………………………...22 2.1. Karyotype.………………………………………………………………………..22 2.1.1.Vật liệu………………………………………………………………………….22 2.1.2. Dụng cụ và thiết bị……………………………………………………………..22 2.1.3.Hóa chất…………………………………………………………………………22 2.1.4.Quy trình………………………………………………………………………...22 2.2.Sinh học phân tử…………………………………………………………………27 2.2.1.QF-PCR………………………………………………………………………...28 2.2.2.FISH……………………………………………………………………………31 2.2.3.Real time PCR…………………………………………………………………33 GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN Trang 1 LẠI ĐÌNH BIÊN BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ CHƢƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN………………………………………37 3.1. Karyotype………………………………………………………………………...37 3.2.Sinh học phân tử…………………………………………………………………..38 3.2.1. QF PCR………………………………………………………………………...38 3.2.2. FISH……………………………………………………………………………41 3.2.3.Realtime PCR chẩn đoán HPV………………………………………………….42 CHƢƠNG 4. KẾT LUẬN…………………………………………………………...44 TÀI LIỆU THAM KHẢO…………………………………………………………...45 GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN Trang 2 LẠI ĐÌNH BIÊN BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ DANH MỤC HÌNH Hình 1. Các giai đoạn của 1 phản ứng PCR……………………………………17 Hình 2. Đường cong khuếch đại. Tín hiệu huỳnh quang được trình bày đã trừ đường nền……………………………………………………………………………..20 Hình 3. FISH chẩn đoán nhanh hội chứng Down, Patau, Edward, Turner, Kleinerfelter trong chẩn đoán trước sinh. Thai nhi mắc hội chúng Patau (trisomy 13)……………………………………………………………………………………..23 Hình 4. Lấy máu ngoại vi ở người lớn………………………………………….24 Hình 5. Lấy máu ngoại vi ở trẻ…………………………………………………24 Hình 6. Cấy máu………………………………………………………………...25 Hình 7. Dung dịch Demecolcine………………………………………………..26 Hình 8. Ly tâm 1800 rpm trong 8 phút………………………………………….26 Hình 9. Nhỏ KCl vào mẫu trong ống ly tâm………………………………….....26 Hình 10. Nhỏ axit acetic vào mẫu đã được ly tâm………………………………27 Hình 11. Sau khi cho dung dịch carnoy vào lần 2………………………………27 Hình 12. Dung dịch có màu trắng khi nhỏ dung dịch Carnoy lần 3…………….27 Hình 13. Nhỏ lame (kiểu nhỏ ngang)…………………………………………...28 Hình 14. Nhỏ lame cao (kiểu nhỏ cao)………………………………………….28 Hình 15. Nhuộm lame bằng Giemsa: buffer…………………………………….28 Hình 16. Quan sát NST dưới kính hiển vi………………………………………29 Hình 17. Ống type được đánh số theo mã số của ống chứa dịch ối…………….31 GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN Trang 3 LẠI ĐÌNH BIÊN BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Hình 18. Mẫu được lắc ủ 990C 800rpm trong 10 phút………………………….31 Hình 19. Màng lọc cuả ống type có màng lọc………………………………….31 Hình 20. Nhỏ dung dịch wash buffer type 6………………………………….....31 Hình 21. Máy PCR………………………………………………………..…….32 Hình 22. Điện di mao quản sản phẩm…………………………………………...33 Hình 23. Cho vào máy lai PCR…………………………………………………35 Hình 24. Gỡ keo sau lai…………………………………………………………35 Hình 25. Đánh mã số cho mẫu…………………………………………………..36 Hình 26. Bật tia UV trong tủ cấy an toàn sinh học cấp 2……………………….37 Hình 27. Máy trích ly DNA tự động…………………………………………….38 Hình 28. Nhỏ mẫu vào Plate………………………………………………….....38 Hình 29. Plate đựng mẫu và dung dịch AW1…………………………………...38 Hình 30. Kết quả NST trên màn hình vi tính chưa sắp xếp…………………….39 Hình 31. Kết quả NST trên màn hình vi tính sau khi sắp xếp………………….39 Hình 32. Kết quả NST in trên giấy……………………………………………...40 Hình 33. Kết quả Trisomy XXX………………………………………………...41 Hình 34. Kết quả bị hội chứng Turner…………………………………………..41 Hình 35. Kết quả bị hội chứng Klinefelte……………………………………....41 Hình 36. Kết quả Trisomy 21( hội chứng down)……………………....……….42 Hình 37. Kết quả Trisomy 13 (hội chứng Patau)……………………………....42 Hình 38. Kết quả Trisomy 18 (hội chứng Edward)…………………………....42 GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN Trang 4 LẠI ĐÌNH BIÊN BÁO CÁO THỰC TẬP TỐT NGHIỆP BỆNH VIỆN TỪ DŨ Hình 39. Kết quả FISH NST 21 và NST 13 bình thường……………….………43 Hình 40. Kết quả FISH 3 NST 21 hội chứng down….………………………….43 Hình 41. Kết quả FISH NST XX và NST 18 bình thường…….………………..43 Hình 42. Kết quả FISH NST XY và NST 18 bình thường………….…………..43 Hình 43. Kết quả âm tính………………………………………………….…….45 Hình 44. Kết quả dương tính…………………………………………................45 GVHD: NGUYỄN KHẮC HÂN HOAN Trang 5 LẠI ĐÌNH BIÊN ... - tailieumienphi.vn