1. Trang Chủ
  2. Y khoa - Dược
  3. Nghiên cứu tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả năng sinh tổng hợp đường trehalose cao phân lập được từ nốt sần của rễ cây lạc

Nghiên cứu tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả năng sinh tổng hợp đường trehalose cao phân lập được từ nốt sần của rễ cây lạc

Bài viết Nghiên cứu tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả năng sinh tổng hợp đường trehalose cao phân lập được từ nốt sần của rễ cây lạc được nghiên cứu với mục đích tìm kiếm nguồn vi khuẩn có khả năng sinh tổng hợp trehalose phục vụ hướng sản xuất đường trehalose bằng phương pháp sinh học, các chủng vi khuẩn từ nốt sần của rễ cây lạc tại Việt Nam được nghiên cứu phân lập và tuyển chọn. TC.DD & TP 16 (5) - 2020 NGHIÊN CỨU TUYỂN CHỌN CHỦNG VI KHUẨN CÓ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP ĐƯỜNG TREHALOSE CAO PHÂN LẬ

Thể loại Tài liệu miễn phí Y khoa - Dược

Số trang 8

Ngày tạo 4/11/2023 12:25:54 PM +00:00

Loại tệp PDF

Kích thước 0.75 M

Tên tệp

Tải Nghiên cứu tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả năng s... (.pdf)

Xem mẫu

  1. TC.DD & TP 16 (5) - 2020 NGHIÊN CỨU TUYỂN CHỌN CHỦNG VI KHUẨN CÓ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP ĐƯỜNG TREHALOSE CAO PHÂN LẬP ĐƯỢC TỪ NỐT SẦN CỦA RỄ CÂY LẠC Nguyễn Thị Thu1, Nguyễn Mạnh Đạt2, Trần Liên Hà3 Với mục đích tìm kiếm nguồn vi khuẩn có khả năng sinh tổng hợp trehalose phục vụ hướng sản xuất đường trehalose bằng phương pháp sinh học, các chủng vi khuẩn từ nốt sần của rễ cây lạc tại Việt Nam được nghiên cứu phân lập và tuyển chọn. Các chủng vi khuẩn được phân lập trên môi trường YEMA có bổ sung Congo red, sau đó được đánh giá khả năng sinh tổng hợp trehalose bằng Kit trehalose K-TREH 07/17 (Megazyme). Nghiên cứu đã phân lập được 30 chủng vi khuẩn từ nốt sần của rễ cây lạc. Kết quả tuyển chọn cho thấy 8/30 chủng vi khuẩn có khả năng sinh tổng hợp đường trehalose, trong đó chủng vi khuẩn L4.2 cho hàm lượng cao nhất, đạt 5,474 mg/100ml dịch lên men. Khảo sát đặc điểm sinh lý sinh hóa của chủng vi khuẩn L4.2 cho thấy: khuẩn lạc tròn, màu trắng đục, kích thước 2-4 mm; tế bào vi khuẩn có dạng hình que, vi khuẩn Gram dương, hiếu khí. Tiến hành định danh chủng vi khuẩn L4.2 bằng phương pháp giải trình tự gen 16S rRNA và so sánh tương đồng cơ sở dữ liệu gene NCBI cho thấy, L4.2 được xác định là chủng Mycolicibacterium neoaurum với độ tương đồng 99,72 %. Mã số Gen- Bank là MT379556.1. Chủng L4.2 có thể đặt tên đầy đủ là Mycolicibacterium neoaurum FIRI L4.2. Việc phát hiện chủng Mycolicibacterium neoaurum FIRI L4.2 có khả năng sinh tổng hợp trehalose trong số các chủng vi khuẩn được phân lập từ nốt sần của rễ cây lạc tại Việt Nam góp phần đa dạng thêm nguồn vi sinh vật có thể ứng dụng vào hướng nghiên cứu sản xuất đường trehalose bằng phương pháp sinh học. Từ khóa: Định danh, Mycolicibacterium neoaurum, nốt sần của rễ cây lạc, phân lập, tuyển chọn, trehalose. I. ĐẶT VẤN ĐỀ Đường trehalose là đường đôi không cao. Trehalose có ứng dụng rộng rãi khử, cấu tạo từ hai phân tử glucose gắn trong ngành y học, mỹ phẩm và đặc biệt với nhau bởi liên kết α,α-1,1-glyco- trong công nghệ thực phẩm. Trehalose sid. Trehalose có độ ngọt bằng 45% so có vai trò bảo vệ tế bào, ổn định pro- với sucrose và có năng lượng khoảng tein, bảo quản, ổn định sản phẩm trong 4 Kcal/g. Nhờ tính không khử, không các sản phẩm bánh kẹo, sữa và thực tham gia phản ứng Maillard, trehalose phẩm chức năng dành cho người bệnh rất ổn định dưới tác dụng của nhiệt độ tiểu đường, béo phì. Trong tự nhiên, 1 KS.Viện Công nghiệp thực phẩm Ngày gửi bài: 1/8/2020 E-mail: thunt@firi.vn Ngày phản biện đánh giá: 15/8/2020 2 TS. Viện Công nghiệp Thực phẩm Ngày đăng bài: 25/9/2020 3 PGS.TS. Đại Học Bách Khoa Hà Nội 95
  2. TC.DD & TP 16 (5) - 2020 trehalose đóng vai trò quyết định đặc II. NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG tính sinh học trong một số các sinh vật PHÁP NGHIÊN CỨU nhân sơ, sinh vật nhân chuẩn và động 2.1. Vật liệu vật không xương sống [2]. Trehalose cũng được tìm thấy ở rất nhiều vi khu- 2.2.1. Mẫu nốt sần ẩn khác nhau như Corynebacterium Mẫu các nốt sần từ giống lạc (được lấy glutamicum [3], Streptomyces hygro- tại thời điểm cây ra hoa nở rộ) LDH 01 scopicus và các loài khác của Myco- tại xã Phú Hòa, huyện Lương Tài, tỉnh bacterium smegmatis [10], Rhizobium Bắc Ninh và giống lạc giống lạc MD9 tại sp. [11] , Sulfolobus acidocaldarius [7]. xã Cúc Phương, huyện Nho Quan, tỉnh Đã có nghiên cứu chỉ ra rằng một số Ninh Bình. Mỗi ruộng được lấy 5 hốc vi khuẩn có khả năng tự sinh tổng hợp ngẫu nhiên. Các nốt sần được tách khỏi trehalose nhằm bảo vệ protein và màng rễ và đất sau đó được bảo quản ở 2 – 40C tế bào dưới tác động của điều kiện môi để sử dụng cho phân lập vi khuẩn. trường sống khắc nghiệt (nhiệt độ cao, 2.1.2. Hóa chất và môi trường chất dinh dưỡng thấp, nồng độ muối cao) như một chất chống thẩm thấu [1]. Môi trường sử dụng để phân lập là YE- Do đó, NaCl thường được bổ sung vào MA-CR (Mannitol 10 g/l; K2HPO4 0,5 môi trường nuôi cấy vi khuẩn để tạo g/l; MgSO4 0,2 g/l; NaCl 0,1 g/l; yeast áp suất thẩm thấu cao trong quá trình extract 0,5 g/l; agar 20 g/l; congo red thí nghiệm đánh giá khả năng sinh tổng 2,5 ml/l). Môi trường nuôi cấy sử dụng hợp trehalose của vi khuẩn. cho kiểm tra khả năng sinh tổng hợp tre- halose là MTA (môi trường YEM, có bổ Trehalose được phát hiện có mặt sung Maltose 10 g/l và NaCl 2%), MTB trong các nốt sần của cây họ đậu với (Chứa môi trường YEM, có bổ sung hàm lượng khác nhau [9], tồn tại sự Maltodextrin 10 g/l và NaCl 2%). Các tương tác cộng sinh nhất định giữa vi môi trường được thanh trùng ở 1210C khuẩn cố định đạm Rhizobium trong trong 15 phút. Trehalose được định các nốt sần cây họ đậu. Đặc biệt ở môi lượng bằng Bộ Kit trehalose K-TREH trường sống khắc nghiệt, hàm lượng 07/17 (Megazyme, Ireland). trehalose được tìm thấy cao hơn, điều này có thể giải thích trehalose được 2.2. Phương pháp nghiên cứu sinh ra bởi các vi khuẩn có trong nốt 2.2.1. Phương pháp nghiên cứu vi sần để bảo vệ tế bào, protein. Do đó, sinh vật để tìm kiếm nguồn vi khuẩn sinh tổng Quá trình phân lập. hợp trehalose phục vụ hướng sản xuất đường trehalose bằng phương pháp Các mẫu nốt sần của rễ cây lạc sau khi sinh học, nghiên cứu này sẽ tiến hành thu thập được phân lập theo phương pháp phân lập và tuyển chọn các chủng vi của Hoben & Somasegaran [6]. Cụ thể khuẩn có khả sinh tổng hợp trehalose như sau, tiến hành khử trùng bề mặt các cao trong nốt sần của rễ cây lạc tại nốt sần bằng cách ngâm vào dung dịch Việt Nam. rửa Ethanol 70% trong 1 phút và NaClO 96
  3. TC.DD & TP 16 (5) - 2020 trong 30 giây. Sau đó rửa lại bằng nước Quan sát hình thái khuẩn lạc, quan sát sạch vô trùng 3-5 lần. Các nốt sần được hình thái vi khuẩn bằng phương pháp nghiền trong 10ml nước cất vô trùng sau nhuộm Gram: lấy 1 vòng que cấy sinh đó pha loãng ở nồng độ: 105 - 1010 và khối chủng vi khuẩn bổ sung vào ống trang trên môi trường YEMA bổ sung nghiệm chứa 5 ml môi trường YEM congo red (YEMA-CR). Giữ ở nhiệt độ lỏng, nuôi ở nhiệt độ 300C sau 24 giờ, 28-30 0C, trong khoảng thời gian 2-5 lấy dịch soi và nhuộm Gram. ngày sau đó kiểm tra và tách các chủng Xác định khả năng hiếu khí hay kỵ vi khuẩn. Các khuẩn lạc đơn được chọn khí của chủng vi khuẩn, tiến hành nuôi ra và tiếp tục được cấy trên các đĩa thạch cấy chủng vi khuẩn ở thể tích 50ml môi chứa môi trường YEMA-CR đến khi các trường YEM lỏng trong 48 giờ. Kết thúc khuẩn lạc thu được đồng nhất, không bị quá trình lên men, ly tâm thu sinh khối. lẫn các khuẩn lạc khác. Sinh khối được đặt trên lam kính và nhỏ Tuyển chọn vi sinh vật có khả năng H2O2 3%. Quan sát hiện tượng sủi bọt sinh tổng hợp trehalose cao chứng tỏ dương tính (hiếu khí), không có a.Khảo sát môi trường nuôi cấy hiện tượng chứng tỏ âm tính (kỵ khí). Các chủng vi khuẩn sau khi được 1.2.2. Phương pháp hóa lý để định phân lập, tiến hành khảo sát khả năng lượng trehalose sinh tổng hợp trehalose bằng cách nuôi Hàm lượng trehalose trong mẫu được môi trường lỏng ở thể tích 100 ml, nhiệt xác định bằng bộ Kit trehalose K-TREH độ 28-300C trong thời gian 5 ngày với 07/17 (Megazyme, Ireland) dựa trên tốc độ lắc 150-250 vòng/phút ở cả hai nguyên tắc và quy trình của hãng khu- môi trường MTA, MTB. yến cáo [8]. b. Phương pháp thu nhận dịch chứa 1.2.3. Phương pháp sinh học phân tử trehalose nội bào để định danh chủng vi khuẩn chọn được Dịch nuôi cấy được ly tâm ở 4500 Vi khuẩn được định tên đến cấp độ vòng/phút trong 15 phút ở 40C để thu loài theo phương pháp giải trình tự gen sinh khối ướt. Lấy 1 g sinh khối ướt thu rADN 16S. Sau khi khuếch đại và giải được hòa vào 5 ml dung dịch đệm phos- trình tự, các chuỗi ADN được so sánh phate pH 7, rồi tiến hành phá vỡ tế bào với GeneBank thông qua giao diện tìm bằng phương pháp sóng siêu âm trong kiếm BLAST nucleotide-nucleotide [4]. 5 chu kì × 30 giây. Sau đó, ly tâm 4500 2.2.4. Phương pháp toán học vòng/phút, 40C trong 15 phút để loại bỏ xác tế bào, ta thu được dịch nội bào có Các số liệu là kết quả trung bình của 3 thể chứa trehalose. lần thí nghiệm lặp lại. Các giá trị trung bình của các mẫu được so sánh ở độ tin Nghiên cứu đặc điểm sinh lý, sinh hóa cậy 95% theo phép kiểm định Tukey định danh vi khuẩn chủng được chọn thực hiện bằng Phân tích phương sai một Đặc điểm sinh lý, sinh hóa của chủng yếu tố (one-way ANOVA, SPSS version được chọn 16.0, SPSS Inc., Chicago, Illinois). 97
  4. TC.DD & TP 16 (5) - 2020 III. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Quan sát nhận thấy các khuẩn lạc có 3.1. Phân lập chọn chủng vi khuẩn màu sắc đa dạng: đỏ, hồng, hồng nhạt, từ rễ của cây lạc trắng đục. Hình dạng vi khuẩn: tròn Sau khi chọn được nốt sần khỏe có hoặc vô định hình. màu hồng từ rễ của cây lạc chúng tôi 3.2. Tuyển chọn chủng vi khuẩn có đã tiến hành phân lập và làm thuần khả năng sinh tổng hợp đường treha- được 30 chủng vi khuẩn. Trong đó 14 lose cao chủng vi khuẩn từ nốt sần của giống lạc 30 chủng vi khuẩn nuôi cấy ở hai LDH 01 và ký hiệu L3.1 đến L3.14 và môi trường MTA, MTB. Tiến hành thu 16 chủng vi khuẩn từ nốt sần của giống nhận trehalose nội bào, sau đó xác định lạc MD9 kí hiệu L4.1 đến L4.16. Qua hàm lượng trehalose bằng kit trehalose kết quả cho thấy 30 chủng đều có khả K-TREH 07/17 (Megazyme). Kết quả năng sinh trưởng, khuẩn lạc mọc sau 2-5 8/30 chủng vi khuẩn có khả năng sinh ngày nuôi cấy, và kích thước khuẩn lạc tổng hợp trehalose được trình bày trên đạt được 0,2-6 mm sau 5 ngày nuôi cấy. Hình 1. 7.000 Hàm lượng trehalose 6.000 f 5.000 (mg/100 ml) 4.000 e 3.000 c 2.000 d b ab b b b b b b b b b 1.000 a 0.000 L3.1 L3.5 L3.9 L4.2 L4.5 L4.9 L4.11 L4.15 Chủng vi sinh vật Môi trường MTA Môi trường MTB Hình 1. Hàm lượng trehalose của các chủng vi khuẩn trong hai môi trường nuôi cấy Ghi chú: Các giá trị trung bình của trehalose cao hơn so với các chủng còn các mẫu được đánh dấu bằng các chữ lại (với mức ý nghĩa p < 0,05) là 5,474 cái khác nhau thể hiện sự khác biệt có mg/100ml dịch lên men ở môi trường ý nghĩa thống kê ở độ tin cậy 95% theo lên men MTB. Từ kết quả trên chúng tôi phép kiểm định Tukey chọn chủng vi khuẩn L4.2 để tiến hành Chủng vi khuẩn L4.2 có hàm lượng các nghiên cứu tiếp theo. 3.3. Đặc điểm sinh lý, sinh hóa và định tên vi khuẩn bằng giải trình tự gen Đặc điểm sinh lý, sinh hóa của chủng được chọn Sau khi quan sát hình thái khuẩn lạc của L4.2 bằng mắt thường nhận thấy: khuẩn lạc tròn, màu trắng đục, kích thước 2-4 mm; và quan sát hình thái vi khuẩn dưới kính hiển vi: Tế bào vi khuẩn có dạng hình que ngắn. Vi khuẩn Gram dương, hiếu khí. 98
  5. TC.DD & TP 16 (5) - 2020 Hình 2. Hình ảnh khuẩn lạc và hình ảnh vi khuẩn của chủng L4.2 Định tên vi khuẩn bằng giải trình tự gen Chủng L4.2 được đi phân loại bằng phương pháp giải trình tự gen ADN ribosome 16s, thu được kết quả như dưới đây: AAGCCTGATGCAGCGACGC- C C G T G C C G TA G C TA A C G C AT- CGCNGAGGGATGACGGCCTTC- TAAGTACCCCGCCTGGGGAG- G G G T T G TA A A C C T C T T T C A G - TACGGCCGCAAGGCTAAAACT- C A C A G A C G A A G C G C A A G T- C A A A G G A AT T G A C G G G G G C - GACGGTATGTGCAGAAGAAG- CCGCACAAGCGGCGGAGCAT- G A C C G G C C A A C TA C G T G C - GTGGATTAATTCGATGCAACG- C A G C A G C C G C G G T A AT A C - CGAAGAACCTTACCTGGGTTT- G TA G G G T C C G A G C G T T G T C - G A C AT G C A C A G G A C G C T G G - C G G A AT TA C T G G G C G TA A A - TAGAGATATCAGTTCCCTTGT- G A G C T C G TA G G T G G T T T G T C - GGCCTGTGTGCAGGTGGTG- GCGTTGTTCGTGAAAACTCA- C AT G G C T G T C G T C A G C T C G T- CAGCTTAACTGTGGGCGTGC- G T C G T G A G AT G T T G G G T TA - G G G C G ATA C G G G C A G A C T G - AGTCCCGCAACGAGCGCAAC- GAGTACTGCAGGGGAGACTG- CCTTGTCCTATGTTGCCAGCG- G A AT T C C T G G T G TA G C G G T G - GGTTATGCCGGGGACTCGTAG- GAATGCGCAGATATCAGGAG- GAGACTGCCGGGGTCAACTC- GAACACCGGTGGCGAAGGC- G G A G G A A G G T G G G G AT G A C - G G G T C T C T G G G C A G TA A C T- GTCAAGTCATCATGCCCCTTAT- GACGCTGAGGAGCGAAAGC- GTCCAGGGCTTCACACATGC- G T G G G G A G C G A A C A G G AT T- TA C A AT G G C C G G TA C A A A G - AGATACCCTGGTAGTCCACGC- G G C T G C G AT G C C G T G A G G T- CGTAAACGGTGGGTACTAGGT- G G A G C G A AT C C T T G TA A A G - GTGGGTTTCCTTCCTTGGGAT- C C G G T C T C A G T T C G G AT C G G - 99
  6. TC.DD & TP 16 (5) - 2020 G G T C T G C A A C T C G A C C C C G T- G C C T T G TA C A C A C C G C C C G T- G A A G T C G G A G T C G C TA G TA - CACGTCATGAAAGTCGGTAA- AT C G C A G AT C A G C A A C G C T- CACCCGAAGCCGGTGGCCTA- G C G G T G A ATA C G T T C C C G G - ACCCCTTGTGGA Mycolicibacterium fluoranthenivorans FA-4 (AJ617741) 96 54 Mycolicibacterium frederiksbergense DSM 44346 (AJ276274) L4.2 Mycolicibacterium neoaurum ATCC 25795 (JMDW01000030) Mycobacterium dioxanotrophicus PH-06 (CP020809) 0.0010 Hình 3. Cây phát sinh chủng loại của chủng vi khuẩn L4.2 thuộc chi Mycolicibacterium Bảng 1. Kết quả đọc trình tự gen so sánh với ngân hàng Genbank Trình tự đối chiếu Độ tương Mã số STT Chủng Tên latinh (Genbank) đồng GenBank Mycolicibacterium 1055/1058 1 L4.2 JMDW01000030 MT379556.1 neoaurum (99,72%) Như vậy, chủng L4.2 được xác định và có khả năng sinh tổng hợp đường treha- đặt tên là Mycolicibacterium neoaurum lose, trong đó chủng vi khuẩn L4.2 cho FIRI L4.2. Mycolicibacterium neoau- hàm lượng cao nhất, đạt 5,474 mg/100ml rum là một loại vi khuẩn hầu như không dịch lên men. Khảo sát đặc điểm sinh lý gây bệnh. Kết quả định danh này khá sinh hóa của chủng vi khuẩn L4.2 cho phù hợp với một số chủng Mycolicibac- thấy: khuẩn lạc tròn, màu trắng đục, kích teria. Trehalose đã được chứng minh có thước 2-4 mm; tế bào vi khuẩn có dạng mặt trong tế bào chất của Mycolicibac- hình que, vi khuẩn Gram dương, hiếu teria và là một thành phần của glycolip- khí. Tiến hành định danh chủng vi khuẩn ids thành tế bào [5]. Từ những phát hiện L4.2 bằng phương pháp giải trình tự gen trên giúp mở ra những nghiên cứu cơ 16S rRNA và so sánh tương đồng cơ sở chế sinh tổng hợp đường trehalose mới dữ liệu gene NCBI cho thấy, L4.2 được từ chủng Mycolicibacteria cũng như xác định là chủng Mycolicibacterium đối với Mycolicibacterium neoaurum. neoaurum với độ tương đồng 99,72 %. Mã số GenBank là MT379556.1. Chủng L4.2 có thể đặt tên đầy đủ là Mycolici- IV. KẾT LUẬN bacterium neoaurum FIRI L4.2. Mycol- Nghiên cứu đã phân lập được 30 chủng icibacterium neoaurum FIRI L4.2 có vi khuẩn từ nốt sần của rễ cây lạc. Kết quả khả năng sinh tổng hợp trehalose trong tuyển chọn cho thấy 8/30 chủng vi khuẩn số các chủng vi khuẩn được phân lập từ 100
  7. TC.DD & TP 16 (5) - 2020 nốt sần của rễ cây lạc tại Việt Nam góp ertson (2000). Three pathways for tre- phần đa dạng thêm nguồn vi khuẩn có halose biosynthesis in mycobacteria. thể ứng dụng vào hướng nghiên cứu sản Microbiology 146(1): 199-208. xuất đường trehalose bằng phương pháp 6. Hoben, H. J. and P. Somasegaran sinh học. (1982). Comparison of the Pour, Lời cảm ơn: Nghiên cứu được tài trợ Spread, and Drop Plate Methods for bởi đề tài mã số ĐTĐLCN.11/18 và ĐT. Enumeration of Rhizobium spp. in 03.17/CNSHCB. Inoculants Made from Presterilized Peat. Appl Environ Microbiol 44(5): 1246-1247. TÀI LIỆU THAM KHẢO 7. Maruta, K., H. Mitsuzumi, T. Naka- 1. Boos, W., U. Ehmann, H. Forkl, W. da, M. Kubota, H. Chaen, S. Fukuda, Klein, M. Rimmele and P. Postma T. Sugimoto and M. Kurimoto (1996). (1990). Trehalose transport and me- Cloning and sequencing of a cluster tabolism in Escherichia coli. Journal of genes encoding novel enzymes of of Bacteriology 172(6): 3450-3461. trehalose biosynthesis from Thermo- 2. Cai, X., I. Seitl, W. Mu, T. Zhang, philic archaebacterium Sulfolobus ac- T. Stressler, L. Fischer and B. Jiang idocaldarius. Biochim Biophys Acta (2018). Biotechnical production of tre- 1291(3): 177-181. halose through the trehalose synthase 8. Megazyme (2017). Trehalose assay pathway: current status and future procedure, K - TREH 07/17. prospects. Application of Microbiol Biotechnol 102(7): 2965-2976. 9. Müller, J., Z.-P. Xie, C. Staehelin, R. B. Mellor, T. Boller and A. Wiemken 3. Carpinelli, J., R. Kramer and E. (1994). Trehalose and trehalase in root Agosin (2006). Metabolic engineering nodules from various legumes. Physio- of Corynebacterium glutamicum for logia Plantarum 90(1): 86-92. trehalose overproduction: role of the TreYZ trehalose biosynthetic pathway. 10. Shimakata, T. and Y. Minatogawa Appl Environ Microb 72. (2000). Essential role of trehalose in the synthesis and subsequent metabo- 4. Cloud, J. L., H. Neal, R. Rosenberry, lism of corynomycolic acid in Coryne- C. Y. Turenne, M. Jama, D. R. Hillyard bacterium matruchotii. 380. and K. C. Carroll (2002). Identifica- tion of Mycobacterium spp. by Using a 11. Streeter, J. G. (1985). Accumulation Commercial 16S Ribosomal DNA Se- of alpha,alpha-trehalose by Rhizobi- quencing Kit and Additional Sequenc- um bacteria and bacteroids. Journal of ing Libraries. Journal of Clinical Mi- Bacteriology 164(1): 78-84. crobiology 40(2): 400-406. 5. De Smet, K. A. L., A. Weston, I. N. Brown, D. B. Young and B. D. Rob- 101
  8. TC.DD & TP 16 (5) - 2020 Summary RESEARCH ON THE SELECTION OF THE BACTERIAL STRAINS ISOLATED FROM PEANUT ROOT NODULES FOR HIGH TREHALOSE-BIOSYNTHESIS ABILITY In order to find out a bacteria source which has a high ability to produce trehalose for the application in the production of trehalose by biological method, bacteria in peanut nodules in Vietnam were isolated and selected. Bacteria were isolated on YEMA with Congo red added, and assessed for the ability to synthesize trehalose using trehalose Kit K-TREH 07/17 (Megazyme). 30 bacterial strains were obtained from peanut nodules. Results of the selection showed that 8/30 strains have ability to biosynthesize trehalose. Among them, the strain L4.2 had the highest ability in trehalose production, achieving 5.474 mg/100ml of culture medium. Study on physiological characteristics of the strain L4.2 showed that: their colonies were round, white and turbid, with the size of 2-4 mm; their cells were rod, Gram positive, and aerobic. Identification of this strain by 16S rRNA gene sequencing followed by comparison of the obtained sequence with known sequenc- es stored in NCBI database showed that L4.2 could be recognized as Mycolicibacterium neoaurum with 99.72 % similarity. GenBank code is MT379556. Therefore, L4.2 could be named as Mycolicibacterium neoaurum FIRI L4.2. The detection of Mycolicibacteri- um neoaurum FIRI L4.2 which has the ability to synthesize trehalose among isolated bac- teria from peanut nodules in Vietnam contributed to the diversity of microbial resources to be applicable for the production of trehalose by biotechnological method. Keywords: Identification, Mycolicibacterium neoaurum, peanut root nodules, isolation, selection, trehalose. 102
nguon tai.lieu . vn
Y học thường thức Y khoa - Dược Sức khỏe trẻ em Sức khỏe người cao tuổi Thời trang - Làm đẹp Sức khỏe phụ nữ Sinh học Thạc sĩ - Tiến sĩ - Cao học Xã hội học