Xem mẫu

  1. -1- -2- B GIÁO D C VÀ ĐÀO T O Công trình ñư c hoàn thành t i Đ I H C ĐÀ N NG Đ I H C ĐÀ N NG LÊ VŨ CHÂU Ngư i hư ng d n khoa h c: TS. NGUY N TH BÍCH TUY T NGHIÊN C U THÀNH PH N HÓA H C VÀ XÁC Đ NH Ph n bi n 1: PGS.TS. LÊ T H I C U TRÚC M T S CH T TRONG D CH CHI T THÂN R C A CÂY RI NG (ALPINIA PURPURATA) Ph n bi n 2: GS.TSKH. TR N VĂN HOÀNG THÀNH PH H I AN - QU NG NAM Chuyên ngành: Hóa H u Cơ Lu n văn ñã ñư c b o v trư c H i ñ ng ch m Lu n văn t t nghi p Th c sĩ Khoa h c h p t i Đ i H c Đà N ng vào ngày 28 Mã s : 60.44.27 tháng 10 năm 2011. TÓM T T LU N VĂN TH C SĨ KHOA H C Có th tìm hi u lu n văn t i: - Trung tâm Thông tin-H c li u, Đ i h c Sư ph m - Trung tâm H c li u, Đ i h c Đà N ng Đà N ng - Năm 2011
  2. -3- -4- M Đ U ri ng còn chưa ñ y ñ và không ñ ng nh t m t s tài li u. Đ góp ph n vào vi c nghiên c u m t cách sâu hơn và r ng hơn các loài 1. Lí do ch n ñ tài ri ng có trong nư c, chúng tôi ch n ñ tài: “Nghiên c u thành Nư c Vi t Nam chúng ta n m trong vùng nhi t ñ i cho nên nh ng ph n hóa h c và xác ñ nh c u trúc m t s ch t trong d ch chi t ñi u ki n khí h u như nhi t ñ , lư ng mưa, ánh sáng ...và hơn h t thân r c a cây ri ng (Alpinia purpurata) thành ph H i An - ñi u ki n th như ng ñ c trưng thích h p cho nhi u loài th c v t có Qu ng Nam” và t ñó có th ñưa ra hư ng khai thác và ng d ng giá tr t n t i và phát tri n. Đó là ngu n tài nguyên sinh h c quý giá, lo i ri ng này trong ñ i s ng. thu c lo i tài nguyên tái t o ñư c. T th i xa xưa cho ñ n xã h i loài 2. M c ñích nghiên c u ngư i hi n nay ñ u khai thác ngu n tài nguyên này ñ làm th c Nghiên c u thành ph n hoá h c c a d ch chi t thân r Alpinia ph m, thu c ch a b nh, các v t li u cũng như nhiên li u cho cu c purpurata trong dung môi hexan, cloroform , th ho t tính sinh h c s ng thư ng ngày. các d ch chi t c a cây Alpinia purpurata trong cao cloroform và cao Trong s các loài cây c quen thu c g n bó v i cu c s ng thư ng nư c. ngày c a nhân dân nư c ta ph i k ñ n ri ng. Ri ng là các th c v t 3. Đ i tư ng và ph m vi nghiên c u thu c chi Alpinia, h Zingiberaceae r t ph bi n nư c ta. Chúng D ch chi t t thân r (Alpinia purpurata) thành ph H i An, t nh không nh ng m c hoang r t nhi u mà còn ñư c tr ng khá ph bi n Qu ng Nam b ng dung môi n-Hexan, cloroform, metanol. ñ dùng làm gia v cho nhi u món ăn ph bi n h ng ngày. Ngoài ra 4. Phương pháp nghiên c u nó còn ñư c như là m t lo i thu c ñư c dùng c trong y h c hi n ñ i 4.1. Nghiên c u lí thuy t và y h c c truy n ñ làm thu c kích thích tiêu hóa, giúp ăn ngon, Phương pháp nghiên c u các h p ch t t nhiên, t ng quan các tài ch a ñ y hơi, các ch ng ñau b ng do l nh, b ng ñ y trư ng, nôn li u v ñ c ñi m hình thái th c v t, thành ph n hoá h c, ng d ng m a, tiêu ch y...Ngày nay, ngư i ta còn tr ng ri ng như là m t lo i c a các cây thu c chi Alpinia, h Zingiberaceae, các phương pháp cây c nh quanh nhà... tách chi t, phương pháp xác ñ nh thành ph n hóa h c……vv Do tính ch t s d ng r ng rãi, nên ñã có nhi u công trình khoa 4.2. Nghiên c u th c nghi m h c nghiên c u v th c v t cũng như hóa h c, nh m l a ch n nâng - Phương pháp chi t: Phương pháp ngâm chi t. cao giá tr s d ng c a m i loài. Tuy nhiên s nghiên c u các loài - Phương pháp v t lí: ri ng v thành ph n hoá h c, công d ng cũng như s lư ng các loài
  3. -5- -6- + S c kí khí kh i ph (GC- MS): ñ xác ñ nh thành ph n, c u t o và hàm lư ng m t s ch t trong d ch cô n - hexan. + S c kí l ng cao áp kh i ph (LC/MS): ñ xác ñ nh thành ph n Chương 1: T NG QUAN hoá h c, c u t o và hàm lư ng m t s ch t trong d ch cô cloroform 1.1. Sơ lư c v m t s lo i cây h G ng (Zingiberaceae) và d ch cô nư c. 1.2. Đ c ñi m hình thái th c v t và thành ph n hóa h c c a m t + Th ho t tính sinh h c c a các d ch chi t . s cây thu c chi Ri ng (Alpinia) 5. Ý nghĩa khoa h c và th c ti n c a ñ tài 1.2.1. Đ c ñi m hình thái th c v t c a m t s cây thu c chi Alpinia T các nghiên c u trên, lu n văn ñã thu ñư c m t s k t qu v i [1], [3] nh ng ñóng góp thi t th c sau: 1.2.2. Chi Alpinia Vi t Nam - Cung c p thông tin khoa h c v thành ph n, c u t o m t s h p nư c ta chi Alpinia khá phong phú. Chúng sinh trư ng trong ch t chính có trong d ch chi t thân r (Alpinia purpurata) cây ri ng vùng r ng núi h u h t các t nh t B c vào Nam. M t s loài ñư c thành ph H i An, t nh Qu ng Nam trong dung môi n-hexan góp coi là ñ c h u, ví d như Alpinia phuthoensis Gagnep., Alpinia ph n nâng cao giá tr s d ng c a cây ri ng. tonkinensis Gagnep… - Đ nh hư ng cho vi c ng d ng các d ch chi t trong dung môi Theo Ph m Hoàng H [11], Vi t Nam có hơn 20 loài Alpinia cloroform và nư c d a trên k t qu ho t tính sinh h c c a các d ch khác nhau. Các loài này ñư c li t kê trong B ng 1.1. chi t này. 6. C u trúc lu n văn B ng 1.1. Các loài Alpinia Vi t Nam [3], [4], [11], [14] Ph n m ñ u 3 trang, k t lu n 1 trang và tài li u tham kh o 3 trang Tên Vi t STT Tên khoa h c Vùng phân b N i dung lu n văn chia làm 3 chương. Nam Chương 1: T ng quan (31 trang) Alpinia bracteata Roxb. Ri ng b , Tuyên Quang, Chương 2: Nh ng nghiên c u th c nghi m ( 7 trang) 1 (Alpinia blepharocalyx K. Ri ng dài Ninh Binh, Lâm Chương 3: K t qu và th o lu n (21 trang) Schum.) lông mép Đ ng Alpinia breviligulata Ri ng mép 2 C nư c Gagnep. ng n,
  4. -7- -8- Ri ng lư i Ri ng Phú 13 Alpinia phuthoensis Gagnep. Phú Th ng n Th Kontum, Lâm Alpinia purpurata 14 Ri ng tía Sài Gòn Ri ng tàu, Đ ng, L ng (Vieill) K. Schum. Alpinia chinensis (Retz.) 3 Lương Sơn, Hà Tây, Hà Alpinia siamensis Bình Tr Thiên, Roscoe. 15 Ri ng Xiêm khương Tĩnh, Th a K. Schum. Bà R a Thiên -Hu Ri ng B c Alpinia tonkinensis Hà Nam, Nam 4 Alpinia conchigera Griff. Ri ng r ng Đ ng Nai 16 b , Gagnep. Đ nh, Ninh Bình Alpinia gagnepainii K. Ri ng Ré B c b 5 Hà Nam Ninh Schum. Ganepain 17 Alpinia venlutina Ridl. Ri ng lông Các t nh mi n Alpinia zerumbet (Pers.), Các t nh mi n 6 Alpinia galanga (L.) Willd. Ri ng n p B c Alpinia speciosa (Wall.) B c, Th a 18 Ri ng m Cao B ng, L ng Schum. Burtt et Sm., Alpinia Thiên-Hu , Bà Alpinia globosa (Lour.) 7 S , Mè tré Sơn, Lai Châu, nutans Roscoe Ra Horan. Vĩnh Phúc Ri ng 1.2.3. Công d ng m t s loài Alpinia 8 Alpinia henry K. Schum. Hà Nam Ninh Henry 1.2.4. Thành ph n hóa h c c a m t s loài Alpinia ñã nghiên c u Ri ng Lào, Hà Tiên, Qu ng 1.2.4.1. Alpinia chinensis Rosc-Ri ng tàu 9 Alpinia laoensis Gagnep. Ki n Tr 1.2.4.2. Alpinia galanga Willd-Ri ng n p (ri ng m, h ng ñ u kh u) Alpinia malaccensis (Burm. Ri ng Hà Giang, Hà 1.2.4.3. Alpinia katsumadai Hayt – Th o ñ u 10 F.) Roscoe. Malacca Tây, Bà R a 1.2.4.4. Alpinia officinarum Hance – Ri ng (ri ng thu c) Ri ng Sài Gòn, Đ ng 1.2.4.5. Alpinia oxyphylla Miq-Ích trí nhân 11 Alpinia mutica Roxb. không múi Lai 1.2.4.6. Alpinia speciosa Schumanm-Ri ng m(mè tré bà) Ri ng, Các t nh phía 1.2.4.7. Alpinia tonkinenesis Gagnep- Ri ng B c b 12 Alpinia officinarum Hance. Ri ng thu c B c 1.2.4.8. Catimbium latilabre (Rild) Holtt- Ri ng gió (mè tré phát)
  5. -9- - 10 - 1.2.4.9. Alpinia breviligulata Gagnep-Ri ng mép ng n CHƯƠNG 2: NGHIÊN C U TH C NGHI M 1.2.4.10. Alpinia conchigera Griff. - Ri ng r ng 2.1. Đ c ñi m chung v cây Alpinia purpurata thành ph H i 1.2.4.11. Alpinia calcarata Rose An, t nh Qu ng Nam 1.2.4.12. Alpinia hainanensis - Ri ng H i Nam 2.1.1. Ngu n g c, s phân b 1.2.4.13. Alpinia smithiae H i An, ngư i dân tr ng cây Alpinia purpurata trong vư n nhà 1.3. Cơ s lý thuy t các phương pháp tách chi t các h p ch t h u ñ làm cây c nh ch u hay b n hoa . cơ [19] 2.1.2. Đ c ñi m th c v t 1.3.1. Cơ s lý thuy t phương pháp chưng c t lôi cu n hơi nư c • Tên khoa h c: Alpinia 1.3.2. Cơ s c a phương pháp chi t Soxklet • Tên th c v t: Alpinia purpurata 1.3.3. Cơ s lý thuy t phương pháp s c kí • H : Zingiberaceae (G ng) 1.3.3.1. Sơ lư c v s c kí • Chi : Alpinia 1.3.3.2. S c ký khí (GC: gas chromatography) Alpinia purpurata (Vieill. ) K.Schum.- Ri ng tía, S ñ , V ng 1.3.3.3. Kh i ph (MS: mass spectroscopy) h ng, Đuôi ch n ñ , V ng h ng. 1.3.3.4. S c ký khí ghép kh i ph ( GC-MS) Cây có thân r m p, ñ nhi u nhánh. Thân th ng cao 1 - 1,5m. Lá l n, có cu ng d ng b dài; phi n lá dài 40 - 50cm, r ng 14 - 16cm, màu xanh bóng, c ng. C m hoa ng n, d ng bông, dài 30cm. lá b c nhi u, màu ñ tươi, x p sát nhau, d ng lòng thuy n. Hoa màu tr ng, cao 5 - 6cm; ñài cao 2,5cm; tràng có ng cao; nh lép cao 1,3cm. Hoa nh ñã b tr y n m trong nách các lá hoa to có màu ñ tươi hay màu h ng nh t – t t p ñ u cành thành hình chùy khá ñ p và b n, có th vài tháng. N u c t c m cũng b n ñư c 5 – 7 ngày. Cây s ng nhi u năm nh thân ng m ñ t g i là căn hành, d ng như chu i hoa, g ng, ri ng… c mang nhi u ch i. M i ch i phát tri n lên trên m t ñ t m t thân gi hình tr
  6. - 11 - - 12 - do b lá b c l y nhau, cao ñ n 1 – 2 mét mang hai hàng lá hai bên. Lá tươi sau ñó ti n hành ngâm trong metanol (phương pháp chi t ngâm to như lá ri ng, thơm. d m). 2.2.2 Hóa ch t và thi t b nghiên c u 2.2.2.1. Hóa ch t Đ th c hi n ñ tài này, chúng tôi s d ng m t s hóa ch t sau: - Clorofom: CHCl3, có M = 119,38 g/mol; t0nc= -63,50C; t0s = 61,20C; t tr ng: 1,48 g/cm3; là ch t l ng không màu, d bay hơi, r t ít tan trong nư c, hòa tan ñư c nhi u h p ch t h u cơ, khá trơ v m t hóa h c nên ñư c dùng làm dung môi ñ chi t nhi u h p ch t. - n- hexan: CH3(CH2)4CH3 có M = 86,172g/mol, t0nc= -950C; t0s = 68,70C. Là hidrocacbon no, ch t l ng, không màu, d bay hơi, không Hình 2.1. Cây Alpinia purpurata thành ph H i An tan trong nư c, tan trong rư u, ete, axeton. Dùng làm dung môi pha Nh hoa b n và ñ p, l i siêng hoa, h u như quanh năm nên ñư c sơn, bi n tính rư u, trong các nhi t k ño nhi t ñ th p. tr ng ñ c t cành ho c chưng ch u. Đ t tr ng c n m mát nhưng ph i - Dung d ch C2H5OH, dung d ch NH3 27%, axit H2SO4 98%, n- d thoát nư c. Ngay g c chùy hoa s p tàn ta th y các ch i cây con hexan, axeton, dung d ch HCl 36,5%, nư c c t, dung d ch KOH xu t hi n nách các lá hoa. Khi hoa héo khô các ch i này có r , có chu n, Na2SO4 khan, NaOH. th tách tr ng ñ gây gi ng. Ta g i ñó là nh ng truy n th . 2.2.2.2. Thi t b thí nghi m Đây là loài cây khá kinh t , cho hoa quanh năm mà không c n B chưng c t ñơn, máy ño s c kí khí ghép n i kh i ph GC-MS chăm sóc nhi u, ch c n lưu ý tr sâu kèn ăn lá, r y bông bám hoa – Máy quay li tâm, máy cô quay chân không, t s y, lò nung, cân và nh t là b nh th i vào mùa mưa nơi d úng ng p. phân tích, c c thu tinh, bình tam giác, ng nghi m, b p cách th y, 2.2. Phương pháp x lý m u th c v t, thi t b , d ng c và hóa b p ñi n, c c s , các lo i pipet, buret, bình ñ nh m c, bình hút m… ch t 2.3. Chu n b các m u d ch chi t thân r ri ng tía 2.2.1. Phương pháp x lí m u th c v t Cân 5kg thân r ñã x lý và ti n hành ngâm chi t nhi t ñ M u (Alpinia purpurata) ñư c l y t i thành ph H i An, t nh phòng nhi u l n b ng dung môi metanol. D ch chi t thu ñư c ñem Qu ng Nam (05/2010). Sau ñó, m u ñư c r a s ch, ñ ráo nư c, c t l c trên gi y l c r i ti n hành c t thu h i dung môi trên máy c t quay lát m ng, cho vào máy xay sinh t ñ nghi n nh , ép l y d ch và b
  7. - 13 - - 14 - thu ñư c cao metanol. Cho nư c vào cao metanol và ti n hành l c + Ph LC/MS ghi trên máy ESI-LC/MS 1100 MSD Trap nhi u l n v i n-hexan m i l n 30ml thu ñư c 2 ph n: spectrometer. - D ch trong n-hexan có màu vàng nâu. Cô ñu i dung môi trên 2.5. Th ho t tính sinh h c các d ch chi t trong dung môi clorofom và máy c t quay ñư c d ch có màu vàng nâu. Cân kh i lư ng d ch cô nư c ñư c 10 gam. * Đ i tư ng th : Các ch ng vi sinh v t và n m gây b nh ki m - Ph n d ch nư c không tan trong n-hexan màu nâu ñ l i ñư c ñ nh. thêm nư c vào. Sau ñó, ti n hành l c và chi t nhi u l n v i Clorofom - Bacillus subtilis: Tr c khu n gram (+), sinh bào t , thư ng thu ñư c 2 ph n: không gây b nh. + D ch tan trong Clorofom có màu nâu ñen (RQC). - Staphylococcus aureus: C u khu n gram (+), gây m các v t + Ph n d ch tan trong nư c: thương, v t b ng, gây viêm h ng, nhi m trùng có m trên da và các - Ph n d ch cô n-hexan, ti n hành chưng c t lôi cu n hơi nư c, thu cơ quan n i t ng. ñư c 2 ph n: - Lactobacillus fermentum: Vi khu n gram (+), là lo i vi khu n + Ph n không tan trong nư c, còn l i trong bình c u ñư c chi t l i ñư ng ru t lên men có ích, thư ng có m t trong h tiêu hóa c a ngư i v i n – hexan ñư c d ch chi t n-hexan (RQH2). và ñ ng v t. + Ph n b lôi cu n theo hơi nư c (RQH1) màu xanh nh t. -Escherichia coli: Vi khu n gram (-), gây m t s b nh v ñư ng 2.4. Xác ñ nh thành ph n hóa h c các d ch chi t tiêu hóa như viêm d dày, viêm ñ i tràng, viêm ru t, viêm l tr c Thành ph n hóa h c d ch chi t thân r ñư c xác ñ nh d a trên s c Th ho t khu n. kí khí ghép kh i ph GC/MS (ñ i v i d ch chi t RQH1) và s c kí tính-sinh Pseudomonas aeruginosa: Vi khu n gram (-), tr c khu n m h c l ng ghép kh i ph LC/MS (ñ i v i các d ch chi t RQC,RQH2). xanh, gây nhi m trung fhuyeets, các nhi m trùng da và niêm m c, + GC/MS : Đư c th c hi n trên h th ng máy MS Agilent 5973N gây viêm ñư ng ti t ni u, viêm màng não, màng trong tim., viêm ru t ñư c ghép v i thi t b s c ký khí GC HP689D v i các ñi u ki n: C t - Salmonella enterica: Vi khu n gram (-), gây b nh thương hàn, HP5-MS (dài 30m, ñư ng kính trong 0,25mm, l p phim dày nhi m trùng ñư ng ru t ngư i và ñ ng v t. 0,25µm); chương trình nhi t ñ 0: - Candida albicans: N m men, thư ng gây b nh tưa lư i tr em 4 /phút 640C (3 phút) 2600C (5 phút) và các b nh ph khoa. * Ch t tham kh o:
  8. - 15 - - 16 - - Kháng sinh Ampicillin cho các ch ng vi khu n Gram (+) v i - Giá tr IC50 ñư c tính toán d a trên s li u ño ñ ñ c c a môi các giá tr MIC trong kho ng 0,004 - 1,20 µg/ml. trư ng nuôi c y b ng máy quang ph TECAN và ph n m m raw - Kháng sinh Cefotaxim cho các ch ng vi khu n Gram (-) v i các data. giá tr MIC trong kho ng 0,07 - 9,6 µg/ml. - Giá tr MBC ñư c xác ñ nh b ng s khu n l c trên ñĩa th ch. - Kháng n m Nystatin cho ch ng n m v i các giá tr MIC trong kho ng 1,8- 3,0 µg/ml. * Môi trư ng nuôi c y MHB (Mueller-Hinton Broth), MHA (Mueller-Hinton Agar), TSB (Tryptic Soy Broth), TSA (Tryptic Soy Broth) cho vi sinh v t; SAB, SA cho n m. * Phương pháp th : Bư c1: Pha loãng m u th b ng phương pháp pha loãng ña n ng ñ M u ban ñ u có n ng ñ 20mg/ml ñư c pha loãng b ng các n ng ñ khác nhau ñ th ho t tính v i các ch ng có t n ng ñ 128µg/ml; 32µg/ml; 8µg/ml; 2µg/ml; 0,5µg/ml ñ i v i ch t s ch, 256µg/ml; 64µg/ml; 16µg/ml; 4µg/ml; 1µg/ml ñ i v i d ch chi t. Bư c 2: Th ho t tính: Chu n b dung d ch vi sinh v t ho c n m v i n ng ñ 5.105 khi ti n hành th . L y 10µl dung d ch m u th theo các n ng ñ ñã ñư c pha loãng thêm 200µl dung d ch vi sinh v t ho c n m, 37OC sau 24 gi , ñ c ñ ñ c t bào trên máy Tecan. Bư c 3: X lí k t qu - Giá tr MIC ñư c xác ñ nh t i gi ng có n ng ñ ch t th th p nh t c ch s phát tri n c a vi sinh v t.
  9. - 17 - - 18 - CHƯƠNG 3: K T QU VÀ BÀN LU N este methyl 9,12,15-Octadecatrienoat (10,24%) v i th i gian lưu 3.1. Thành ph n hóa h c d ch chi t RQH1 trong dung môi n - 38,74 phút, β - Himachalene (4,38%) v i th i gian lưu 27,74 phút, hexan Germacrene B(CAS) (2,74%) v i th i gian lưu 27,62 phút, β – D ch chi t thân r trong dung môi n - hexan ñư c xác ñ nh TPHH Elemene (2,05%) v i th i gian lưu 19,77 phút. Các c u t còn l i có d a vào k t qu phân tích GC/MS. hàm lư ng không vư t 2%. K t qu c th th hi n b ng 3.1. B ng 3.1. Thành ph n hóa h c d ch chi t thân r (RQH1) trong n – hexan RT Thành TT Tên ch t (phút) ph n % 1 3,32 Axetic axit, butyl ester 0,20 2 4,1 Bezene,ethyl 0,25 3 4,24 Benzene, 1,3-dimethyl 0,89 4 4,65 Styrene 0,40 5 4,7 p-Xylene 0,35 6 5,56 α - Pinene 0,66 7 5,92 Camphene 1,31 8 6,53 Sabinene 0,60 9 6,63 1β-pinen 1,03 Hình 3.1. S c kí ñ GC/MS c a d ch chi t RQH1 trong n - 10 6,96 β -Myrcene 0,28 hexan 11 8,05 Limonen 1,04 D a trên s c kí ñ GC/MS c a d ch chi t thân r trong dung môi 12 8,13 1,8-Cineole 0,41 n- hexan, th y có 61 ch t. Trong ñó, c u t có hàm lư ng cao nh t là 13 8,67 Benzen, 1,3-ñiethyl 0,77 este methyl Hexadecanoat (23,85%) v i th i gian lưu là 34,63 phút. 14 8,85 1,4-ñiethyl Benzen 0,85 Ngoài ra, nh ng c u t có hàm lư ng l n ph i k ñ n ñó là ester 15 9,03 1,4-ñiethyl Benzen 0,40 methyl 9,12-Octadecadienoat (21,05%) v i th i gian lưu 38,6 phút, 16 11,69 Campho 1,25
  10. - 19 - - 20 - 17 12,12 Borneol 0,29 42 27,09 Điethyl allylphosphonate 0,45 18 14,82 1,2,4-Triethyl Benzene 0,30 43 27,25 α - amorphene 0,43 19 16,12 Pentamethyl Benzen 0,45 44 27,50 2- Naphthalenemethanol 0,37 20 16,56 Naphthalene, 1-methyl 0,66 45 27,62 Germacrene B(CAS) 2,74 21 17,11 Naphthalene, 2-methyl 0,36 46 27,73 β - Himachalene 4,38 22 18,01 α – Terpinene 0,45 47 28,76 Juniper camphor 1,96 23 19,77 β - Elemene 2,05 48 29,46 Tetradecanoic acid,methyl este… 0,48 24 19,96 Tetradecane 0,36 49 29,77 2,6,10-Cycloundecatrien-1-one 1,19 25 20,09 Naphthalene, 1,6-ñimethyl 0,96 50 29,98 7-Octylidenebicyclo[4.1.0]heptane 0,30 26 20,55 Naphthalene, 2,6-ñimethyl 1,03 51 32,09 Pentadecanoic acid, methyl este.. 0,67 27 20,64 Naphthalene, 1,7-ñimethyl 0,94 52 34,29 Isocritonilide 1,31 28 21,05 γ - Elemene 0,97 53 34,63 Ester methyl Hexadecanoat 23,85 29 21,15 Naphthalene, 2,3-ñimethyl 0,40 54 35,53 Đibutyl phthalate 0,33 30 21,68 α - Humulene 1,22 55 35,74 Phosphoric acid, 4-methoxypheny… 0,63 31 22,59 1,1-Biphenyl, methyl 0,46 56 36,12 Oxirane, 2-bromo-3-chloro-2-(1-… 0,47 32 22,68 β - Selinene 0,52 57 37,02 Este methyl Heptadecanoat 0,45 33 22,95 α- Selinene 0,56 58 38,6 Ester methyl 9,12-Octadecadienoat 21,05 34 23,79 Naphthalene, 1,4,6-trimethyl 0,56 59 38,74 ester methyl 9,12,15 Octadecatrienoat 10,24 35 23,88 1,1-Biphenyl, 2,3-ñimethyl 0,53 60 38,85 methyl 9-Octadecanoat 0,53 36 23,92 2,3,5-Trimethyl Naphtalene 0,13 61 39,33 ester methyl Octadecanoat 1,01 37 24,14 Valencence 0,72 T ng c ng 100 38 24,21 α- Gurjunene 0,37 3.2. Thành ph n hóa h c d ch chi t RQH2 trong dung môi n- 39 24,33 Selina-3,7(11)-ñiene 0,46 hexan 40 24,78 Germacrene B 1,36 41 26,97 β -Maaliene 0,34
  11. - 21 - - 22 - B ng 3.2. Thành ph n hóa h c d ch chi t RQH2 trong n – hexan Thành RT Thành TT RT (phút) TT ph n % (phút) ph n % 1 0,228 0,0732 9 22,426 5,1406 2 4,968 0,6257 10 23,173 3,3725 3 9,917 7,7383 11 23,822 12,2323 4 16,790 6,1780 12 24,592 3,2500 5 19,868 19,3949 13 25,138 1,8074 6 20,916 8,3049 14 22,443 3,7827 7 21,779 4,8976 15 26,091 19,2784 8 22,070 3,9892 Hình 3.8. S c ký ñ LC/MS c a d ch chi t RQH2 trong dung môi n - hexan D a trên s c ký ñ LC/MS, ta th y d ch chi t thân r cây ri ng tía trong dung môi n - hexan có kho ng 15 c u t . C u t chính có th i gian lưu (RT) là 19,868 phút. Ngoài ra, m t s c u t có th i gian lưu là 26,091 phút; 23,822 phút; 20,916 phút; 9,917 phút cũng có hàm lư ng tương ñ i cao. K t qu th hi n b ng 3.2.
  12. - 23 - - 24 - 3.3. Thành ph n hóa h c d ch chi t RQC trong dung môi B ng 3.3 Thành ph n hóa h c d ch chi t thân r cây ri ng tía Cloroform trong cloroform TT RT (phút) Thành ph n % 1 7,119 1,1809 2 14,831 3,8632 3 15,221 1,4174 4 21,380 5,2285 5 22,067 4,7461 6 23,807 7,5122 7 24,811 3,1193 8 26,122 72,9324 Hình 3.12. S c ký ñ LC/MS c a d ch chi t thân r cây ri ng tía trong cloroform D a trên s c ký ñ LC/MS, ta th y d ch chi t thân r cây ri ng tía trong dung môi cloroform có kho ng 8 c u t . C u t chính có th i gian lưu (RT) là 26,122 phút. Ngoài ra, m t s c u t có th i gian lưu là 23,807 phút; 21,380 phút; 22,067 phút; 14,831 phút cũng có hàm lư ng tương ñ i cao. K t qu phân tích th hi n c th b ng 3.3.
  13. - 25 - - 26 - 3.4. K t qu th ho t tính sinh h c d ch chi t trong dung môi K T LU N VÀ KI N NGH cloroform và nư c 1. K T LU N B ng 3.4. K t qu th ho t tính kháng sinh d ch chi t thân r Qua tri n khai các n i dung nghiên c u, chúng tôi ñã thu ñư c m t s k t qu sau: ri ng tía H i An trong các dung môi cloroform và nư c. B ng phương pháp ngâm chi t nhi u l n trong dung môi methanol, sau ñó chi t l i v i các dung môi khác nhau theo sơ ñ chi t ñã xây d ng, ñã tách và xác ñ nh thành ph n hóa h c các d ch chi t: µ K t qu IC50 (µg/ml) 1. 1. B ng phương pháp s c kí khí- kh i ph liên h p (GC/MS) ñã tách và xác ñ nh hàm lư ng ph n trăm c a 61 c u t có trong d ch hexan, ph n Vi khu n ch ng Vi khu n ch ng b lôi cu n theo hơi nư c ch y u là este có th ti p t c nghiên c u ñ s N m Gram (+) Gram (-) d ng làm hương li u, trong ñó các c u t có hàm lư ng cao là: este methyl Hexadecanoat (23,85%) ; este methyl 9,12-Octadecadienoat Lactobacillus fermentum Staphylococcus aureus TT Tên (21,05%); ester methyl 9,12,15-Octadecatrienoat (10,24%); các c u t Salmonella enterica Candida albican Escherichia coli Bacillus subtilis Pseudomonas m u còn l i có hàm lư ng không vư t 4%. aeruginosa 2. B ng phương pháp s c kí l ng- kh i ph liên h p (LC/MS) ñã tách và xác ñ nh hàm lư ng ph n trăm c a 15 c u t có trong d ch n - hexan, ph n không b lôi cu n theo hơi nư c, 8 c u t có trong d ch cloroform. Tuy nhiên, các c u t trên ñ u chưa ñư c ñ nh danh, c n ñư c nghiên c u sâu hơn. 1 RQH2 >256 >256 >256 >256 >256 >256 >256 2. KI N NGH 2 RQN >256 >256 >256 >256 >256 >256 >256 Loài Alpinia nói chung và cây ri ng tía (Alpinia purpurata) ñã nghiên c u nói riêng là m t trong nh ng cây thu c quý có nhi u ng K t qu th ho t tính sinh h c cho th y: d ng trong ñ i s ng và y h c. Đ ngh các c p có th m quy n t ch c - D ch chi t thân r ri ng tía trong cloroform và nư c không có nghiên c u m t cách sâu r ng hơn nh m làm rõ ng d ng c a cây tính kháng các ch ng vi khu n thu c ch ng Gram (+) và (-), không ri ng tía, qua ñó ph c v t t hơn ñ i s ng nhân dân ta. có tính kháng n m Candida albicans n ng ñ ≤ 256 µg/ml. K t lu n: Ri ng tía không có ho t tính sinh h c, có th s d ng như m t lo i cây c nh ho c có th ti p t c nghiên c u ñ ph c v trong công nghi p làm hương li u.
nguon tai.lieu . vn