- Trang Chủ
- Điện-Điện tử-Viễn thông
- Luận văn: Nghiên cứu chiết tách, khảo sát tính chất của lectin từ hạt đậu đỏ tây (phaseolus vulgais) và đề xuất hướng ứng dụng
Xem mẫu
- 1
B GIÁO D C VÀ ĐÀO T O
Đ I H C ĐÀ N NG
PHAN TH VI T HÀ
NGHIÊN C U CHI T TÁCH, KH O SÁT
TÍNH CH T C A LECTIN T H T Đ U
Đ TÂY (PHASEOLUS VULGAIS) VÀ Đ
XU T HƯ NG NG D NG
Chuyên ngành: Công ngh Th c ph m và Đ u ng
Mã s : 60.54.02
TÓM T T LU N VĂN TH C SĨ K THU T
Đà N ng – Năm 2011
- 2
Công trình ñư c hoàn thành t i
Đ I H C ĐÀ N NG
Ngư i hư ng d n khoa h c:PG S. T S.Tr n Th Xô
Ph n bi n 1: GS.TS. Đào Hùng Cư ng.
Ph n bi n 2: GS.TSKH. Lê Văn Hoàng.
Lu n văn s ñư c b o v t i H i ñ ng ch m
Lu n văn t t nghi p th c sĩ k t h u t h p t i
Đ i h c Đà N ng vào ngày 26 tháng 7 năm 2011.
Có th tìm hi u lu n văn t i:
- Trung tâm Thông tin -H c li u, Đ i h c Đà N ng
- Trung tâm H c li u, Đ i h c Đà N ng
- 3
M Đ U
1. TÍNH C P THI T C A Đ TÀI
Lectin là m t glycoprotein có ho t tính sinh h c, có kh năng
g n k t v i t bào h ng c u, tương tác có ch n l c v i saccharide.
Lectin ng d ng trong nhi u lĩnh v c khác nhau như nông nghi p,
sinh hóa, vi sinh v t h c, t bào h c, mi n d ch h c, y dư c h c…
Lectin có kh năng gây ngưng k t v i các t bào vi khu n, n m men
ho c n m m c. Do v y, lectin t ñ u tương (SBA) và c sên (HPA)
dùng ñ nh n d ng vi khu n gây b nh than Bacillus anthracis (ch ng
r t khó phân bi t v i các ch ng Bacillus khác) [13].
Lectin ñư c phân b r ng rãi trong th c v t, ñ ng v t và c
vi sinh v t. Lectin thu nh n t các ngu n khác nhau thì có c u trúc,
tr ng lư ng phân t và thành ph n hóa h c cũng như ñ c tính sinh
h c khác nhau.
Xu t phát t nh ng lí do trên, ñ ñi sâu vào nghiên c u
lectin h ñ u chúng tôi ch n ñ tài nghiên c u: “Nghiên c u chi t
tách, kh o sát tính ch t c a lectin t h t ñ u ñ tây (phaseolus
vulgaris) và ñ xu t hư ng ng d ng”, nh m góp ph n khai thác
ngu n tài nguyên lectin phong phú t ngu n th c v t c a Vi t Nam.
2. M C ĐÍCH NGHIÊN C U
- Chi t tách lectin t h t ñ u ñ tây, tinh s ch lectin này.
- Kh o sát m t s tính ch t lý hóa c a lectin.
- Đ xu t hư ng ng d ng c a nó.
3. Đ I TƯ NG VÀ PH M VI NGHIÊN C U
- Nguyên li u h t ñ u ñ tây.
- T bào h ng c u ngư i.
- 4
- N m men bia.
- Nghiên c u ñư c th c hi n quy mô phòng thí nghi m.
4. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U
- Phương pháp xác ñ nh ñ m, phương pháp xác ñ nh hàm
lư ng protein, phương pháp xác ñ nh hàm lư ng gluxit t ng b ng
phương pháp Bertran, phương pháp xác ñ nh ho t ñ lectin, phương
pháp ñi n di trên gel polyacrylamide.
5. Ý NGHĨA KHOA H C C A Đ TÀI
- Kh o sát m t s thành ph n hóa h c c a h t ñ u ñ tây
mua t i ñ a bàn Đà N ng. Kh o sát ñư c hàm lư ng lectin có trong
ñ u ñ tây.
- Tăng thêm nh ng hi u bi t v c u t o và tính ch t c a lectin
h ñ u.
6. Ý NGHĨA TH C TI N C A Đ TÀI
- Xây d ng qui trình chi t tách và xác ñ nh nh ng tính ch t
lý hóa ñ c trưng c a lectin, t ñó có th thu nh n lectin quy mô l n
hơn ñ ñưa vào ng d ng th c t .
- T ngu n lectin ñã ñư c nghiên c u các ñ c tính có th ñ
xu t các hư ng ng d ng khác nhau.
7. C U TRÚC C A LU N VĂN
Ngoài ph n m ñ u, k t lu n, tài li u tham kh o và ph l c
trong lu n văn ñư c thành các chương như sau :
Chương 1: T ng quan
Chương 2: Nguyên li u và phương pháp nghiên c u
Chương 3: K t qu và th o lu n.
- 5
Chương 1
T NG QUAN
1.1. LƯ C S VÀ TÌNH HÌNH NGHIÊN C U LECTIN
TRÊN TH GI I VÀ VI T NAM
1.1.1. Sơ lư c l ch s lectin
1.1.2. Tình hình nghiên c u lectin trên th gi i và Vi t Nam
1.1.2.1. Tình hình nghiên c u lectin trên th gi i
1.1.2.2. Tình hình nghiên c u lectin Vi t Nam .
1.2. S PHÂN B LECTIN TRONG SINH GI I
1.2.1. S phân b lectin trong th c v t
Vi t Nam tính ph bi n c a lectin l n ñ u tiên ñư c
nghiên c u vào năm 1983 b i Nguy n Th Th nh và c ng s . K t qu
nghiên c u 90% loài ñ u Vi t Nam có ch a lectin [11].
1.2.2. S phân b lectin trong ñ ng v t
1.2.3. S phân b lectin trong vi sinh v t.
1.3. TÍNH CH T C A LECTIN
1.3.1. Thành ph n hóa h c, c u trúc và kh i lư ng phân t c a
lectin
1.3.1.1. Thành ph n hóa h c
V y lectin có b n ch t là protein, ch y u là glycoprotein.
1.3.1.2. C u trúc c a lectin
Lectin là m t lo i protein nên lectin có c u trúc b c 1, 2, 3 và
b c 4 như nh ng protein thông thư ng khác. Ngoài nh ng lectin có
c u trúc không gian ñơn gi n, các lectin có c u trúc không gian ph c
- 6
t p ñ u ch a trung tâm ho t ñ ng, ñây là nơi liên k t v i
carbohydrate và quy t ñ nh ho t ñ c a lectin. Theo tác gi Bourillon
(1973) ngoài g c acid amin t o nên trung tâm ho t ñ ng, m t s ion
kim lo i cùng tham gia ho t ñ ng c a lectin như là các ion Mg2+,
Mn2+.
1.3.1.3. Kh i lư ng phân t c a lectin
Lectin là m t polyme sinh h c, có kh i lư ng phân t l n,
kh i lư ng phân t dao ñ ng trong ph m vi khá r ng t hàng ngàn
cho ñ n hàng trăm ngàn Dalton [30]. Lectin t ngu n g c th c v t có
kh i lư ng phân t bé nh t là lectin t r cây Urtica dioica (h gai
Urticaceae), kho ng 8,5 kDa. Lectin t m t s th c v t cũng ñã
ñư c xác ñ nh kh i lư ng phân t như lectin c a m t s loài mít chi
Artocarpus có kh i lư ng phân t kho ng 50 kDa, lectin t loài t o
ñ (Plumosa plumosa) có kh i lư ng phân t 150 kDa [20].
1.3.2. Các tính ch t ñ c trưng c a lectin
1.3.2.1. Tính tan c a lectin
1.3.2.2. S tương tác c a lectin v i ñư ng
Kh năng tương tác v i ñư ng là m t trong nh ng tính ch t
ñi n hình c a lectin. Lectin có th liên k t v i c phân t ñư ng ñơn
l n c g c ñư ng n m trên b m t t bào. Các lo i ñư ng như
glucose, galactose, manose … có kh năng tương tác v i nhi u lo i
lectin [20]. Kh năng tương tác ñ c hi u c a lectin - ñư ng ñã ñư c
ng d ng nhi u trong các nghiên c u t bào h c, huy t h c và mi n
d ch h c.
1.3.3. Đ c tính sinh h c và mi n d ch h c c a lectin
1.3.3.1. Kh năng gây ngưng k t t bào
- 7
1.3.3.2. Kh năng kích thích và kìm hãm phân bào
1.3.3.3. Các quy t ñ nh kháng nguyên nh n bi t
1.4. NG D NG C A LECTIN
S d ng lectin ñ phân lo i nhóm máu là ng d ng s m
nh t, cho ñ n nay v n còn ñư c áp d ng r ng rãi. Phương pháp xác
ñ nh nhóm máu b ng lectin cho k t qu nhanh, chính xác mà không
c n dùng huy t thanh m u. Lectin ñư c s d ng như m t công c
ch n ñoán có hi u qu (d a vào kh năng tác d ng ñ c hi u lên m t
s lo i vi sinh v t), k t h p v i các xét nghi m thông thư ng khác ñ
nâng cao giá tr ch n ñoán b nh.
Do b m t c a vi khu n mang các g c ñư ng, lectin có th
k t h p v i các v trí liên k t ti m năng này, thêm vào ñó là tính ñ c
hi u khi n chúng tr thành công c h u ích trong vi c nh n d ng vi
khu n [22].
Do có kh năng liên k t v i ñư ng và các h p ch t ch a
ñư ng (thành ph n c u t o quan tr ng trên b m t t bào), lectin có
ti m năng ng d ng r t l n trong sinh - y h c.
Vi c nghiên c u l a ch n lectin tương tác ñ c hi u v i các
lo i vi khu n có th giúp ích trong vi c ñ nh danh các vi sinh v t này.
1.5. T NG QUAN V Đ U Đ TÂY
Đ c tính th c v t: ñ u tây (Phaseolus vulgaris) thu c h
th c v t Fabiaceae. Cây thu c lo i thân th o th p hay dây leo. Hàm
lư ng protein trong ñ u tây chi m kho ng 17-23% tr ng lư ng ch t
khô [24].
- 8
Chương 2
NGUYÊN LI U VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U
2.1. NGUYÊN LI U, HÓA CH T VÀ THI T B
2.1.1. Nguyên li u nghiên c u
Nguyên li u nghiên c u là h t ñ u ñ tây (Phaseolus
vulgaris). Thu mua Trung tâm Thương nghi p, thành ph Đà
N ng.
2.1.2. Hóa ch t
Nh ng hoá ch t s d ng trong nghiên c u này là nh ng hoá
ch t có ñ tinh khi t cao, s d ng trong phân tích, ñư c mua c a các
hãng Sigma, Merk và Trung Qu c. Các d ng c và hóa ch t thu c
trung tâm công ngh sinh h c môi trư ng thu c ñ i h c Bách Khoa
Đà N ng và trung tâm y t d phòng thành ph Đà N ng.
- H ng c u các nhóm máu ngư i do khoa Huy t h c, b nh vi n Đa
Khoa Đà N ng cung c p.
2.1.3. D ng c và thi t b
S d ng các d ng c và thi t b thu c trung tâm công ngh
sinh h c môi trư ng thu c ñ i h c Bách Khoa Đà N ng và trung tâm
y t d phòng thành ph Đà N ng.
2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U
2.2.1. Phương pháp xác ñ nh ñ m [14]
2.2.2. Phương pháp xác ñ nh hàm lư ng protein
2.2.2.1. Xác ñ nh hàm lư ng protein thô [14]
2.2.2.2. Phương pháp xác ñ nh hàm lư ng protein t ng s b ng
phương pháp ño quang [6]
- 9
Xác ñ nh hàm lư ng protein t ng s b ng ño h p th quang
λ=280 và λ=260 (nm) trên máy quang ph k hi u UV
TM
(SmartSpec Plus Spectrophotometer - Bio Rad).
Hàm lư ng protein ñư c tính theo công th c
PC (pr) = (1,55*A280 - 0,77*A260)* D (mg/ml)
Trong ñó: PC (pr): N ng ñ protein (mg/ml). A260, A280 : Đ h p th
quang c a m u λ = 260 (nm) và λ = 280 (nm). D: Đ pha loãng c a
dung d ch m u (l n).
2.2.3. Phương pháp xác ñ nh hàm lư ng gluxit t ng b ng phương
pháp Bertran
2.2.4. Phương pháp xác ñ nh ho t ñ lectin [13]
Ho t ñ lectin ñư c xác ñ nh theo phương pháp ngưng k t
h ng c u c a Gebauer trên b n nh a ñáy nh n microtitter.
Cách ti n hành: Dùng micropipetter cho vào m i gi ng c a b n nh a
microtitter 50 µl ñ m PBS pH 7,2. L y 50 µl m u thí nghi m cho vào
gi ng th nh t tr n ñ u, l y ra 50 µl ñưa vào gi ng th hai tr n ñ u,
r i l i l y 50 µl t gi ng th hai cho vào gi ng th 3… cho ñ n gi ng
th 10 (l y ra 50 µl r i b ñi). Như v y ta có n ng ñ m u pha loãng
2n l n (n là s gi ng ñã pha loãng, ñây là gi ng th 10). Gi ng th
11 và 12 không có m u ñư c s d ng làm m u ñ i ch ng.
Cho vào m i gi ng c a b n nh a 50 µl h ng c u c a các
nhóm máu. H ng c u c a các nhóm máu trư c khi s d ng ñư c r a
s ch b ng nư c mu i sinh lý (NaCl 0,9%) t 2-3 l n (ly tâm 3000
rpm/5’) và pha loãng các n ng ñ 2-5% b ng nư c mu i sinh lý.
V y t ng th tích m u và h ng c u trong m i gi ng là 100 µl.
- 10
Đ yên b n nh a ch a m u lectin và h ng c u nhi t ñ
phòng t 30 phút ñ n 1 gi , ti n hành ñ c k t qu . K t qu ñư c ñ c
d a trên s ñ i chi u v i các gi ng ñ i ch ng. Gi ng ñ i ch ng có
hi n tư ng h ng c u t g n xu ng ñáy gi ng. Gi ng nào mà h ng
c u t o l p màng m ng không t g n xu ng ñáy gi ng thì ch ng t
có hi n tư ng ngưng k t, nghĩa là có ho t tính lectin. K t qu ñ c
gi ng cu i cùng có s ngưng k t. Ho t tính gây ngưng k t ñư c tính
như sau :
- Ho t ñ chung (HĐC) c a lectin (vi t t t là HAA) ñư c xác ñ nh
là ngh ch ñ o c a ñ pha loãng l n nh t c a d ch lectin mà ñó nó
còn có kh năng gây ngưng k t toàn b lư ng h ng c u [28].
2n
HĐC (Đv/ml) =
V
Trong ñó
n là s gi ng còn ho t tính lectin.
V : th tích m u thí nghi m. (µl)
- Ho t ñ riêng (HĐR): là giá tr ho t ñ c a lectin trong 1 mg
protein.
HĐC
HĐR (Đv/mgpr) =
mgpr
2.2.5. Phương pháp chi t tách và tinh s ch lectin
2.2.6. Phương pháp ñi n di trên gel polyacrylamide [27]
2.3. PHƯƠNG PHÁP XÁC Đ NH S TƯƠNG TÁC C A ION
KIM LO I - LECTIN VÀ CÁC LO I ĐƯ NG - LECTIN
2.3.1. Tương tác c a ion kim lo i - lectin
2.3.2. Tương tác các lo i ñư ng - lectin
- 11
Chương 3
K T QU VÀ TH O LU N
3.1. K T QU KH O SÁT NGU N NGUYÊN LI U
Ti n hành xác ñ nh m t s ch tiêu như ñ m, hàm lư ng
protein thô, hàm lư ng gluxit ñư c th c hi n theo qui trình c a
TCVN (ph l c 2) và quá trình xác ñ nh ñư c th c hi n t i Trung
tâm K thu t Tiêu chu n Đo lư ng ch t lư ng 2. K t qu thu nh n
ñư c trình bày t i b ng 3.1.
B ng 3.1: M t s thành ph n hoá h c c a h t ñ u ñ tây.
STT Ch tiêu ĐVT Phương pháp th K t qu
1 Đ m % TCVN 4295:2009 12,42
Hàm lư ng TCVN 4295:2009
2 % 18,20
protein thô PK2-F49
Hàm lư ng
3 % TCVN 4594-88 54,40
gluxit
K t qu kh o sát các thành ph n c a h t ñ u ñ tây cho th y
ñ m c a h t là 12,42% th p hơn so v i ñ m c a h t ñ u tr ng tây
(14%). Hàm lư ng gluxit t ng s ñư c xác ñ nh là 54,4 cao hơn so
v i hàm lư ng gluxit h t ñ u tr ng tây (47,7%) và ñ u Hà lan
(48,0%). Hàm lư ng protein thô c a h t ñ u ñ tây là 18,2% thì l i
tương ñ i th p hơn c a h t ñ u tr ng tây (20,6%) và ñ u Hà lan
(19,7%).
- 12
3.2. NGHIÊN C U CHI T TÁCH LECTIN
3.2.1. Nghiên c u phương pháp chi t tách
Quá trình chi t tách ñư c th c hi n theo sơ ñ sau:
B tñ uñ
Hòa ñ m PBS (pH =7,2)
T l b t ñ u: ñ m là 1:5
Ly tâm l nh (40C)
6000 vòng/ 15phút
C n
D ch chi t protein thô
V i m c tiêu là kh o sát ñi u ki n chi t d ch lectin thô ñ t
hi u qu cao, chúng tôi ti n hành theo 3 phương pháp khác nhau:
L y m t lư ng b t ñ u ñ như nhau (50g) hòa tan vào m t
lư ng ñ m như nhau (250ml) và ti n hành chi t theo 3 phương pháp
khác nhau:
- Phương pháp 1: B t ñ u sau khi hòa ñ m ti n hành khu y
(30 phút).
- Phương pháp 2: B t ñ u sau khi hòa ñ m ti n hành siêu âm
b ng máy siêu âm (30 phút).
- Phương pháp 3: B t ñ u sau khi hòa ñ m ti n hành làm
l nh ñông - tan giá - l nh ñông - tan giá.
Sau khi chi t tách d ch protein thô b ng 3 phương pháp như
trên, ti n hành xác ñ nh hàm lư ng protein thô theo phương pháp ño
quang m c (2.2.2.2). K t qu thu ñư c b ng 3.2.
- 13
B ng 3.2: Hàm lư ng protein c a d ch chi t thô
Phương pháp 1 2 3
Hàm lư ng protein (mg/ml) 49,19 51,83 49,90
Hàm lư ng protein thô thu nh n theo phương pháp 2 là cao
nh t do s d ng tác nhân v t lý là sóng siêu âm có tác d ng phá v t
bào nên protein ñư c gi i phóng ra nhi u hơn.
Nh m xác ñ nh ho t ñ c a lectin thu ñư c theo 3 phương
pháp trên tôi ti n hành th kh năng ngưng k t v i h ng c u theo
phương pháp ñư c trình bày m c 2.2.4. K t qu ñư c th hi n
b ng 3.3.
B ng 3.3: Ho t ñ lectin c a m u thu nh n theo 3 phương pháp
Nhóm HĐC (ñv/ml) HĐR (ñv/mgpr)
máu 1 2 3 1 2 3
A 1280 2560 2560 26,02 49,39 51,3
B 1280 2560 2560 26,02 49,39 51,3
O 640 640 640 13,01 12,35 12,8
AB 2560 2560 2560 52,04 49,39 51,3
1- M u thu ñư c theo phương pháp 1
2- M u thu ñư c theo phương pháp 2
3- M u thu ñư c theo phương pháp 3
Đ so sánh ho t ñ chung c a lectin thu ñư c 3 m u trên
tôi xây d ng ñ th như hình 3.2 và 3.3.
- 14
HĐC (ñv/ml)
3000
2560 2560 2560 2560 2560 2560 2560
2500
2000 M u1
M u2
1500 M u3
1280 1280
1000
640 640 640
500
0
A B O AB Nhóm máu
Hình 3.2: Đ th bi u di n ho t ñ chung c a 3 m u
d ch lectin thô
HĐR (ñv/mg)
60
51.3 49.39 51.3 52.0449.39 51.3
49.39
50
40 M u1
M u2
30 26.02 26.02 M u3
20
13.01 12.3512.8
10
0
A B O AB Nhóm máu
Hình 3.3: Đ th bi u di n ho t ñ riêng c a 3 m u d ch
lectin thô
- 15
K t qu cho th y ho t ñ chung c a lectin m u 1 là th p hơn
so v i 2 m u còn l i. Trong ñó m u 2 và m u 3 có ho t ñ chung là
như nhau ñ i v i ngưng k t các nhóm máu.
M u 1 có HĐR th p nh t so v i m u 2 và 3. M u 3 có HĐR
cao hơn so v i 2 m u còn l i. Qua chi t tách d ch lectin theo 3
phương pháp trên cho th y r ng phương pháp 3 ñ t hi u su t chi t
tách cao, tuy nhiên phương pháp này l i tiêu t n nhi u th i gian và
nhiên li u hơn so v i phương pháp 2.
D a vào k t qu thu ñư c trên, chúng tôi ch n m u chi t
tách theo phương pháp 2 ñ th c hi n các nghiên c u ti p theo.
3.2.2. Kh o sát t l ñ m dùng ñ chi t
Nh m kh o sát t l ñ m PBS dùng ñ chi t tách lectin ñ t
hi u qu cao chúng tôi ti n hành chi t tách lectin theo phương pháp
ñã ch n ph n trên và s d ng ñ m PBS (pH = 7,2) v i các m u
1,2,3 tương ng theo t l nguyên li u và ñ m khác nhau là 1:4; 1:5;
1:6 ñư c chi t trên cùng 1 lư ng b t ñ u là 50g.
Sau khi chi t tách chúng tôi ti n hành xác ñ nh hàm lư ng
protein t ng và ho t ñ lectin. K t qu thu ñư c ñư c bi u di n trên
ñ th hình 3.4.
- 16
Hình 3.4: Đ th bi u di n hàm lư ng protein và ho t ñ
lectin c a 3 m u v i t l ñ m chi t khác nhau.
K t qu trên hình 3.4 có th th y r ng lư ng ñ m tăng thì
lư ng protein thu nh n ñư c cũng tăng theo. Hàm lư ng protein thu
nh n ñư c nhi u nh t m u 3 nhưng không l n hơn nhi u so v i
m u 2. Đ th cũng cho th y r ng ho t ñ riêng c a lectin m u 2 là
l n nh t (49,911ñv/mgpr) so v i 2 m u còn l i.
- 17
Trên cơ s so sánh hàm lư ng protein t ng s và ho t ñ c a
lectin thu ñư c theo 3 t l ñ m kh o sát khác nhau có th nh n th y
r ng s d ng t l b t ñ u ñ : ñ m PBS là 1:5 cho hi u qu chi t
tách cao nh t. Vì v y tôi ch n t l ñ m dùng ñ chi t tách d ch
protein lectin là 1:5 ñ chi t tách.
3.3. NGHIÊN C U KH O SÁT M T S TÍNH CH T LÝ
HÓA C A LECTIN
3.3.1. Kh o sát nh hư ng c a nhi t ñ ñ n ho t ñ c a lectin
Hình 3.5: Đ th bi u di n nh hư ng c a nhi t ñ ñ n ho t ñ
c a lectin.
Nhi t ñ t i thích cho lectin ho t ñ ng là trong kho ng 300C ÷
400C. K t qu này cũng phù h p v i k t qu công b c a m t s tác
gi nghiên c u v lectin c a h ñ u [1].
- 18
3.3.2. Kh o sát nh hư ng c a pH ñ n ho t ñ c a lectin
K t qu trên hình 3.6 cho th y lectin ñ u ñ tây bi u hi n ho t
ñ cao trong vùng pH trung tính và hơi ki m, pH = 7 ÷ 8. Trong
kho ng pH này ho t ñ cao nh t là 2560ñv/ml. Theo k t qu nghiên
c u c a tác gi Trương Văn Châu thì lectin chi t tách t h t ñ u cove
cũng có kho ng pH t i thích là 6 ÷ 8, tương t v i k t qu thu nh n
trong nghiên c u này.
Hình 3.6: Đ th bi u di n nh hư ng c a pH ñ n ho t ñ lectin.
3.3.3. Kh o sát nh hư ng c a ion kim lo i ñ n ho t ñ lectin
B ng 3.4: nh hư ng c a các ion kim lo i ñ n ho t ñ c a lectin
Mu i N ng ñ kìm hãm N ng ñ kích thích
BaCl2 - 0,25M
CuSO4 - 0,0625M
Mg(NO3)2 - 0,25M
CaCO3 - 0,25M
KCl - -
- 19
Ghi chú: d u “-“ trong b ng bi u th ph n ng không b kìm hãm
T k t qu th c nghi m cho th y mu i KCl không nh
hư ng ñ n ho t ñ c a lectin. Các lo i mu i còn l i, trong thành
ph n c a chúng có các cation Ba2+, Cu2+, Mg2+, Ca2+ ñ u có nh
hư ng ñ n ho t ñ c a lectin. S có m t c a các ion này làm tăng
ho t ñ c a lectin. Tuy nhiên kh năng kích thích c a cation Cu2+ là
m nh nh t vì n ng ñ th p nh t là 0,0625M nó ñã có tác d ng làm
tăng ho t ñ c a lectin.
3.3.4. Kh o sát s tương tác ñ c hi u v i các lo i ñư ng
K t qu thu ñư c trong b ng 3.5
B ng 3.5: Tương tác ñ c hi u gi a ñư ng v i các lo i lectin
Tên các lo i ñư ng N ng ñ kìm hãm
D - Glucose -
D - Manose -
D - Arabinose -
Lactose -
Saccharose -
Ghi chú: - không kìm hãm
Qua k t qu thu ñư c có th th y r ng trong 5 lo i ñư ng s
d ng là D-glucose, D-manose, D-arabinose, lactose, saccharose thì
không có lo i ñư ng nào có kh năng c ch rõ r t ñ n ho t ñ c a
lectin ñ u ñ tây. K t qu này tương ñ ng v i các nghiên c u trư c
ñó v lectin c a ñ u ñ tây là không tương tác v i các lo i ñư ng
ñơn mà ch tương tác v i oligosaccharide và polysaccharide [20].
- 20
3.4. TINH S CH LECTIN Đ U Đ TÂY
Ti n hành tinh s ch lectin thông qua sơ ñ tinh s ch lectin
như sau
B t ñ u ñ tây
Chi t rút b ng ñ m PBS, pH 7,2
t l b t ñ u: ñ m PBS là 1:5. Khu y, siêu âm
30 phút; li tâm l nh (4oC), 6000 vòng/phút
Ly tâm l nh (40C), 6000 vòng/ 15phút
C n (b )
D ch chi t protein thô
ch a lectin
K t t a protein trong etanol 96%
(t l d ch chi t: etanol là 1:3, t = 30 phút, 40C)
D ch t a protein
Ly tâm l nh (40C), 6000 vòng/ 15phút
D ch (b )
Thu t a protein
Hòa tan l i trong ñ m PBS (pH = 7,2)
Ch ph m
lectin thô
Ch y qua c t s c ký Silicagel
Ch ph m lectin
3.4.1. X lý sơ b m u thô
M u d ch lectin sau khi ti n hành sơ b các bư c như trên thì
k t qu thu ñư c có hàm lư ng protein thô b ng 22,03mg/ml và ho t
ñ lectin là 2560ñv/ml.
nguon tai.lieu . vn